• Москалёв Евгений Александрович
  • 2007
  • 24

Аномальные изменения картины метилирования геномной ДНК при хроническом В-клеточном лимфолейкозе автореферат диссертации для написания диплома, курсовой работы, тема для доклада и реферата

Аномальные изменения картины метилирования геномной ДНК при хроническом В-клеточном лимфолейкозе - темы дипломов, курсовиков, рефератов и докладов Ознакомиться с текстом работы
Специальность ВАК РФ: 03.00.04 — Биохимия
  • Реферун рекомендует следующие темы дипломов:
  • Эпигенетические механизмы онкогенеза
  • Природа эпигенетических модификаций
  • Реферун советует написать курсовую работу на тему:
  • Нормальная картина метилирования геномной
  • Механизм репликации и взаимосвязь разных типов эпигенетических модификаций в клетке
  • Реферун советует написать реферат на тему:
  • Реализация эпигенетической информации
  • Ограниченность генетической (мутационной) модели онкогенеза
  • Реферун предлагает написать доклад на тему:
  • Системы передачи онкогенных сигналов в клетке
  • Онкомаркеры в молекулярной клинической диагностике опухолей
  • Роль цитогенетических изменений в патогенезе
  • Анализ флуоресцентных сигналов
Поделиться с друзьями:

Выдержки из автореферата диссертации Москалёв Евгений Александрович, 2007, 03.00.04 — Биохимия

Актуальность проблемы. Важнейшие характерные свойства опухолевых клеток обусловлены аномальным функционированием сигнальных путей, контролирующих клеточный цикл и апоптоз (Hanahan, Weinberg, 2000, Копнин, 2004) Митогенные и антиапоптотические сигналы передаются в ядро, где происходит активация генов-мишеней, запускающих генетические программы клеточного роста, пролиферации клеток и избегания апоптоза (Татосян, 2004)

В основе данных нарушений лежит изменение экспрессии ключевых для онкогенеза генов - протоонкогенов и опухолевых супрессоров, продукты которых задействованы в передаче сигналов в клетке и их регуляции Согласно традиционной модели онкогенеза, нарушение экспрессии генов является результатом генетических аберраций (Knudson, 2001)

Существенный пересмотр представлений об этиологии опухолей в настоящее время связан с обнаружением значительных эпигенетических нарушений, связанных с изменением активности генов во всех типах новообразований (Esteller, 2005) К эпигенетическим модификациям клетки относят картину метилирования геномной ДНК и характер модификаций хроматина Они определяют митотически наследуемые изменения функции генов, происходящие без нарушения нуклеотидных последовательностей (Yoo, Jones, 2006) Таким образом, аномальное изменение экпрессии генов в опухолях может иметь негенетическую природу

Аберрантное энзиматическое de novo метилирование CG-динуклеотидов в промоторных областях генов-супрессоров (CpG-островках) в опухолях сопряжено с потерей экспрессии и функционально аналогично инактивации генов вследствие мутаций (Bird, 2002, Киселёва, Лихтенштейн, 2004) Изменения нормального метилирования ДНК появляются на самых ранних этапах онкогенеза, когда клетка еще не приобрела свойства опухолевой (Holst et al, 2003), и поэтому представляют исключительную ценность для ранней диагностики, прогноза и классификации онкозаболеваний (Laird, 2003, Залетаев и др, 2004) Эпигенетическая инактивация транскрипции обратима деметилирующие агенты реактивируют ген, открывая возможность новой эпигенетической терапии онкозаболеваний (Yoo, Jones, 2006) Аномальное метилирование генов онкогенных сигнальных путей может предрасполагать к накоплению мутаций в генах тех же путей (неслучайность мутаций), приводя к прогрессии опухоли (Baylin, Ohm, 2006) Функционально эпигенетические и генетические нарушения при канцерогенезе представляются одинаково важными и находятся в тесном взаимодействии друг с другом (Feinberg, 2004, Ванюшин, 2005)

Хронический B-клеточный лимфолейкоз (В-ХЛЛ) представляет одно из наиболее распространенных лимфопролиферативных заболеваний, крайне гетерогенное по своему течению и характеризующееся нарушением апоптоза и клеточного цикла (Никитин, 2001, Zent, Kay, 2004) Цитогенетические нарушения в опухолевом клоне редко обнаруживаются на ранних стадиях заболевания (Chiorazzi et al, 2005), что позволяет предположить важный вклад эпигенетических изменений в патогенез В-ХЛЛ Однако характер метилирования геномной ДНК в опухолевых клетках при В-ХЛЛ мало изучен Данные литературы характеризуют общее содержание 5-метилцитозина, картину метилирования нескольких генов, а также аномальное метилирование отдельных CG-динуклеотидов в масштабе генома (Rush et al, 2004) Функциональное значение изменений картины метилирования ДНК при В-ХЛЛ в целом остается неясным

Многие широко используемые методы изучения картины метилирования ДНК обладают низкой информативностью и позволяют изучать метилирование лишь нескольких нуклеотидов за один эксперимент (например, метилспецифичная ПЦР) Методы анализа метилирования протяженных локусов (Ажикина, Свердлов, 2005) или целого генома (Rush, 2004) удовлетворяют условию масштабности, но достаточно трудоемки и ограничивают исследование нуклеотидами в участках узнавания метилчувствительных рестриктаз Особую актуальность поэтому приобретает разработка нового метода масштабного изучения метилирования, с помощью которого можно одновременно исследовать характер метилирования множества (сотни, тысячи) нуклеотидов разных локусов/генов сразу в нескольких биологических пробах В настоящей работе данные условия реализуются с использованием технологии ДНК-чипов (Hoheisel, 2006)

Разработка и применение данного метода для сравнительного исследования картины метилирования ДНК в опухолевых клетках при хроническом В-клеточном лимфолейкозе и В-лимфоцитах здоровых доноров имеет важное теоретическое и практическое значение Обнаружение аберрантно метилированных генов существенно расширяет наши представления об эпигенетическом механизме заболевания Аномально метилированные гены могут рассматриваться в перспективе в качестве биомаркеров для диагностики и прогноза В-ХЛЛ, а также мишеней для новых эпигенетических подходов к терапии

Цель и задачи исследования Целью настоящей работы было сравнительное исследование картины метилирования 5'-областей (промотор, первый экзон) потенциально важных для онкогенеза генов в опухолевых клетках при хроническом В-клеточном лимфолейкозе и в В-лимфоцитах здоровых доноров Для выполнения цели поставлены следующие задачи

1 выбрать гены-кандидаты для изучения метилирования их 5'-регионов (по данным литературы),

2 разработать метод масштабного анализа картины метилирования ДНК с помощью гибридизации на in situ синтезированных олигонуклеотидных ДНК-чипах,

3 выделить ДНК из периферической крови больных В-ХЛЛ и В-лимфоцитов здоровых доноров и модифицировать ее бисульфитом натрия,

4 разработать олигонуклеотидные праймеры и провести ПЦР-амплификацию исследуемых областей генов на модифицированной бисульфитом ДНК (пробоподготовка),

5 спроектировать олигонуклеотидный состав ДНК-чипов для изучения характера метилирования искомых генов и синтезировать олигонуклеотидные зонды на поверхности чипов,

6 провести сравнительный гибридизационный анализ картины метилирования ДНК больных В-ХЛЛ и здоровых доноров,

7 верифицировать полученные результаты для некоторых генов с помощью широко используемых альтернативных методов - метилспецифичной ПЦР и бисульфитного секвенирования ДНК,

8 сопоставить характер метилирования ДНК с признаками, имеющими прогностическое значение при В-ХЛЛ мутационным статусом генов иммуноглобулинов IgVH, стадией заболевания, исходным уровнем лимфоцитов, временем удвоения лимфоцитов, характером поражения костного мозга и полом,

9 предложить гипотетический эпигенетический механизм нарушения контроля передачи митогенных и проапоптотических сигналов в клоне B-XJIJI

Научная новизна. Разработанный метод масштабного анализа картины метилирования ДНК с помощью гибридизации на ДНК-чипах с т situ синтезированными олигонуклеотидными зондами Не имеет аналогов в отечественной литературе и позволяет дискриминировать пробы ДНК разной степени метилирования В ходе одного эксперимента возможен одновременный анализ метилирования порядка 1000 индивидуальных CG-динуклеотидов в каждой из восьми биологических проб Впервые в опухолевых клетках B-XJTJI выявлено аберрантное метилирование генов сигнального пути Wnt WIF1 (65%, 30/46), DKK1 (50%, 23/46 образцов), PYG01 (86%, 19/22), DACT1 (6%, 3/46), DKK2 (3/7), DKK3 (2/7), проапоптотических генов APAF1 (4/10), ВАХ (3/10) и RAD9A (3/10), гена, контролирующего клеточный цикл, UBE2C (4/6), а также генов BCL6 (6/6) и FSCNI (2/6) Аномальное метилирование данных генов, очевидно, имеет неслучайный характер и, по-видимому, вносит важный вклад в патогенез хронического лимфолейкоза, приводя к нарушению контроля клеточного цикла и передачи митогенных и апоптотических сигналов вклетках B-XJIJI

Практическая значимость. С помощью гибридизации на олигонуклеотидных ДНК-чипах возможен эпигенетический анализ любого типа опухоли, а также поиск новых локусов, подверженных метилированию при онкогенезе После дополнительных испытаний данный метод может быть использован в диагностических целях по ранее описанным маркерам метилирования ДНК в биоптатах опухолей или биологических жидкостях организма Установленное в работе аберрантое метилирование генов SFRPI, WIF1, PYGOl и ряда других при В-ХЛЛ (в т ч на ранних стадиях заболевания), а также характер метилирования отдельных CG-динуклеотидов создает основу для разработки диагностического теста на основе метилспецифичной ПЦР, а также испытаний деметилирующих агентов (например, децитабина) в качестве средств эпигенетической химиотерапии Обнаруженное метилирование генов негативных регуляторов сигнального пути Wnt важно для разработки направленной терапии B-XJTJI (например, ингибиторов Р-катенина)

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на биолого-почвенном факультете Воронежского государственного университета при чтении лекций по биохимии, в спецкурсах «Молекулярная биология», «Генетическая инженерия», «Молекулярная диагностика», а также при проведении практических и семинарских занятий по биохимии в Воронежской государственной медицинской академии

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на международных, региональных и университетских конференциях ежегодной международной конференции по методам анализа с помощью биочипов «Chiptechnologien» (Франкфурт, 2006), XIX зимней молодежной научной школе «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (Москва, 2007), 2-ой конференции Германского центра исследования рака (Хайдельберг, 2006), 10-й Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2006), межрегиональных конференциях, посвященных памяти проф А А Землянухина (Воронеж, 2006, 2007), ежегодной научной сессии отчетной конференции преподавателей и сотрудников Воронежского

государственного университета (2007), ежегодной конференции «Философские проблемы биологии и медицины» (Воронеж, 2004) По итогам 2-ой конференции Германского центра исследования рака сообщение признано победителем конкурса

Публикации Основные результаты настоящей диссертационной работы изложены в 12 публикациях - 6 статьях, 5 тезисах и 1 учебно-методическом пособии

Работа поддержана 6-месячной стипендией Германской службы академических обменов (DAAD) и Министерства образования и науки РФ по совместной российско-немецкой программе «Михаил Ломоносов» (2004-2005 гг ) и годовой стипендией для молодых ученых от DAAD (2005-2006 гг )

Положения, выносимые на защиту

1 Разработанный гибридизационный метод анализа картины метилирования ДНК на олигонуклеотидных чипах позволяет проводить масштабное исследование метилирования ДНК (порядка 1000 CG-динуклеотидов) одновременно в нескольких биологических пробах

2 Аномальное метилирование генов, контролирующих клеточный цикл, и проапоптотических генов является частым событием в опухолевых клетках при В-

3 Высокая частота метилирования генов негативных регуляторов онкогенного сигнального пути Wnt предполагает эпигенетический механизм его аномальной активации в клоне В-ХЛЛ

4 Гипотетическая схема дерегуляции клеточного цикла и апоптоза, ассоциированной с аберрантным метилированием генов в клетках В-ХЛЛ

Структура и обьем работы Диссертация изложена на 203 страницах машинописного текста (150 стр основного текста и 53 стр приложения) и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения результатов, заключения, выводов, списка литературы (297 источников) Иллюстрационный материал включает 41 рисунок и 8 таблиц Материал, не вошедший в основной текст работы, изложен в пяти приложениях

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные данные свидетельствуют о том, что хронический В-клеточный лимфолейкоз имеет не только генетическую природу и развивается в результате онкогенных мутаций, но в значительной степени обусловлен эпигенетически Обнаружены неизвестные ранее при В-ХЛЛ существенные изменения картины метилирования важных для онкогенеза генов, которые вместе с описанными ранее хромосомными аберрациями могут вносить важный вклад в патогенез данного лимфопролиферативного заболевания и предрасполагать к его прогрессии

Комплексное исследование картины метилирования ДНК в клетках В-ХЛЛ во многом стало возможным благодаря разработанному нами методу гибридизации модифицированной бисульфитом ДНК на ДНК-чипах с от situ синтезированными олигонуклеотидными зондами Так, при гибридизации проб ДНК из крови больных В-ХЛЛ и здоровых доноров на трех ДНК-чипах стало возможным одновременное сравнительное изучение метилирования 1544 CG-динукпеотидов 33 генов в норме и при патологии Данный метод дает воспроизводимые результаты, позволяет дискриминировать пробы ДНК разной степени метилирования и обладает очевидным преимуществом перед рутинно используемыми методами исследования метилирования ДНК, которые позволяют изучить метилирование только нескольких CG-динуклеотидов за один эксперимент Проверка результатов гибридизационного анализа на ДНК-чипах с помощью альтернативных способов - бисульфитного секвенирования и метилспецифичной ПЦР, выявила полное соответствие результатов, полученных разными методами

Аномально метилированные при В-ХЛЛ гены, обнаруженные в данной работе, кодируют компоненты сигнальных систем, контролирующих клеточный цикл и апоптоз и поэтому важных для онкогенеза Возможные последствия метилирования отражены в предлагаемой нами гипотетической схеме дерегуляции клеточного цикла и апоптоза (рис 7) Предлагаемая модель основана на предположении о потере экпрессии гиперметилированных генов в опухолевых клетках В пользу справедливости этого допущения свидетельствует большое множество литературных данных по реактивации метилированных генов в культуре опухолевых клеток или первичных опухолях после деметилирования ДНК с помощью ингибиторов ДНК-метилтрансфераз (Aguilera et al, 2006, Ai et al, 2006, Liu et al, 2006)

Установленная в работе высокая частота аномального метилирования генов компонентов сигнального пути Wnt предполагает особую важность данной системы передачи сигнала в патогенезе хронического В-клеточного лимфолейкоза Девять аномально метилированных генов негативно регулируют сигнальный путь Wnt (рис 7) Таковы гены WIF1, SFRP1,2, FRZB (SFRP3), DKK1-3, белковые продукты которых

Внеклеточное ^пространство

Цитозоль

Ядро

Нарушение контроля клеточного цикла

Эпигенетическая инактивация внутреннего

Пролиферация, избегание апоптоза

генетическая инактивация ^^

треннего пути апоптоза ***** .........•■••••'""""____

ЦП мембрана

ядерная аспаза9) мембрана

Рис. 7. Гипотетическая схема эпигенетической дерегуляции клеточного цикла и апоптоза в клетках хронического В-клеточного лимфолейкоза.

прямая активация опосредованная активация прямое ингибирование опосредованное ингибирование потеря активности Выделение серым - метилирование гена +Р - фосфорилирование +и - убиквитинирование

препятствуют узнаванию сигнальных молекул Wnt рецептором Fz на клеточной поверхности А также ген DACTI, ингибирующий цитозольный участок цепи передачи сигнала, и ген Е-кадхерина CDH1, цитоплазматический домен которого способен связывать белок ß-катенин - ключевой компонент сигнального пути, уменьшая его концентрацию в цитоплазме В результате ß-катенин может накапливаться в цитоплазме и транслоцироваться в ядро, где функционирует как транскрипционный фактор, активируя антиапоптотические гены (например, survivin) и гены, регулирующие клеточный цикл (MYC, циклин D и др) Результатом гиперметилирования данных генов в клетках B-XJIJI может быть активирование пути Wnt, которое действительно имеет место и отчасти обусловливает устойчивость к апоптозу т vitro (Lu et al, 2004)

Установлено аберрантное метилирование гена UBE2C, продукт которого является убиквитин-конъюгирующим ферментом, необходимым для деградации митотических циклинов, а также гена CDKN2B, кодирующего ингибитор циклин-зависимой киназы 4 Согласованая эпигенетическая инактивация данных генов (потеря экспрессии UBE2C при В-ХЛЛ продемонстрирована Klein et al, 2006), по-видимому, приводит к нарушению нормальной регуляции клеточного цикла и пролиферации клеток В-ХЛЛ

Метилирование гена RAD9A (инактивирован при В-ХЛЛ по Klein et al, 2006), продукт которого активируется при повреждении ДНК и через онкосупрессорный белок р53 приводит к остановке клеточного цикла в G1/S чекпойнте и апоптозу, может отчасти объяснять феномен генетической нестабильности клеток В-ХЛЛ (Chiorazzi et al, 2005) Метилирование генов DAPK1 (протеинкиназа, ассоциированная с рецептором смерти), ВАХ и APAF1 (проапоптотические компоненты внешнего пути атюптоза), по-видимому, вносят вклад в известный феномен устойчивости клеток В-ХЛЛ к апоптозу in vivo

В данной работе впервые продемонстрирована высокая частота de novo метилирования гена PYGOI, продукт которого функционирует в ядре клетки как коактиватор транскрипции генов-мишеней пути Wnt Функциональное значение метилирования гена PYGOI при В-ХЛЛ не совсем понятно Однако его гиперметилирорвание может отражать потерю равновесия между экспансией метилирования (от метилированной в норме части промотора) (рис 6) и защиты от него в клетках В-ХЛЛ (Киселева, Лихтенштейн, 2004)

Мы не утверждаем, что метилирование каждого гена имеет важную биологическую роль и располагает к прогрессии заболевания Но эпигенетическая потеря функции, по меньшей мере, некоторых из них (рис 7), по-видимому, вносит важный вклад в патогенез хронического лимфолейкоза

Не установлено метилирование генов сигнальных путей Jak/STAT и Ras, характерное для других типов опухолей, в т ч для B-клеточных лимфом (Koyama et al, 2003) Потеря экспрессии гена SOCS1 ингибитора пути Jak/STAT (Klein et al, 2001), очевидно, имеет другой неэпигенетический механизм

Высокая частота метилирования исследованных генов при В-ХЛЛ (например, SFRP1 - 91%, WIF1 - 65%, DKK1 - 50%) и их важная для онкогенеза роль подтверждает предположение о неслучайном, направленном механизме de novo метилирования генов в неоплазиях, выдвинутое рядом исследователей по результатам эпигенетического анализа солидных опухолей (Baylin, Ohm, 2006)

Таким образом, нами предложен возможный эпигенетичекий механизм развития хронического B-клеточного лимфолейкоза, который значительно дополняет описанную ранее генетическую картину данного заболевания Нарушения нормальной картины метилирования ряда важных для онкогенеза генов

свидетельствуют о целесообразности дальнейших поисков в области эпигенетики В-XJTJI для более полного понимания событий, инициирующих опухолевую трансформацию B-клеток, истинного механизма данного заболевания и разработки новой эффективной терапии, а также эпигенетических маркеров для ранней диагностики и прогноза

ВЫВОДЫ

1 Разработан метод масштабного анализа картины метилирования ДНК посредством гибридизации модифицированной бисульфитом ДНК с in situ синтезированными олигонуклеотидными зондами ДНК-чипа Характер метилирования каждого CG-динуклеотида оценивается с помощью пары 17-21-членных олигонуклеотидных зондов, комплементарных метилированной и неметилированной ДНК-мишеням Возможно одновременное исследование метилирования порядка 1000 CG-динуклеотидов в нескольких биологических пробах

2 Олигонуклеотидные зонды ДНК-чипа способны статистически достоверно дискриминировать пробы ДНК разной степени метилирования 91% пар зондов - 0 и 100% метилированную ДНК, 74% пар - 0, 50 и 100% метилированную ДНК, 62% пар - образцы ДНК 0, 25, 50 и 100% степени метилирования

3 Показана принципиальная возможность количественного анализа степени метилирования ДНК в биологических образцах с помощью олигонуклеотидных зондов чипа, селектированных по способности дискриминировать 0, 50 и 100% метилированные пробы и характеризующихся линейной зависимостью вычисленных индексов метилирования от известной степени метилирования гибридизуемой ДНК Обнаружено 12% пар зондов, полностью удовлетворяющих данному критерию

4 Предложены две стратегии эпигенетического анализа на ДНК-чипах Для поиска новых аномально метилированных локусов целесообразно качественное сравнительное исследование картины метилирования ДНК опухолевых и нормальных клеток без предварительной селекции зондов Для ранее описанных метилированных генов (например, в диагностических целях) возможно изучить степень их метилирования в опухоли, используя олигонуклеотидные зонды, способные к количественному анализу

5 Впервые установлено аберрантное метилирование потенциально важных в патогенезе хронического лимфолейкоза генов посредством гибризизации на олигонуклеотидных чипах проапоптотические гены АР AFI (4 из 10 проб крови больных), ВАХ (3/10), RAD9A (3/10), негативный регулятор клеточного цикла UBE2C (4/6), транскрипционный регулятор BCL6 (6/6), гомолог фасцина FSCN1 (2/6), ген негативных регуляторов сигнального пути Wnt DKK2 (3/7), DKK3 (2/7), FRZB (3/7), SFRP2 (2/7), ген ядерного компонента сигнального пути Wnt PYGOl (6/6) Подтверждено гиперметилирование генов кальцитонина CALCA (4/10), Е-кадхерина CDH1 (8/10), ингибитора циклин-зависимой киназы CDKN2B (5/10), проапоптотической протеинкиназы DAPK1 (3/10), рецептора глутамата GRM7 (5/5) и антагониста р53 TWIST2 (8/10)

6 Впервые показана высокая частота аномального метилирования генов негативных регуляторов сигнального пути Wnt WIF1 (65%, 30/46), DKK1 (50%, 23/46) и PYGOl (86%, 19/22) Ген SFRP1 дифференциально метилирован при В-XJIJI (91%, 20/22) Не выявлено метилирование генов, кодирующих негативные регуляторы сигнальных путей Jak/STAT и Ras CISH, PTPN6, SOCS1/3, RASSF1,4,5

7 Исходный уровень лимфоцитов в крови достоверно выше у больных с гиперметилированными генами SFRP1 и PYGOl Не обнаружено корреляции гиперметилирования с другими прогностическим факторами при B-XJIJI мутационным статусом генов иммуноглобулинов IgVH, временем удвоения лимфоцитов, характером поражения костного мозга и полом

8 Аберрантное метилирование генов DKK1, PYGOl, SFRP1 и WIF1 обнаружено на всех (в т ч ранних стадиях) B-XJIJI, что является основой для использования характера метилирования данных генов в дальнейшем как эпигенетических маркеров для ранней диагностики заболевания

9 Установленное гиперметилирование 5-областей генов, по-видимому, носит неслучайный характер и представляет эпигенетический механизм дерегуляции клеточного цикла и апоптоза, вносящих важный вклад в патогенез B-XJIJI

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ

1 Епринцев А Т Полимеразная цепная реакция как универсальный метод диагностики и идентификации генов / А Т Епринцев, Е А Москалев, В Н Попов // Системный анализ и управление в биомедицинских системах - 2001 - Т 1, № 1 - С 915

2 Епринцев А Т Применение блоттинга для исследования экспрессии генов и их идентификации / А Т Епринцев, Е А Москалев, В Н Попов // Системный анализ и управление в биомедицинских системах -2002 - Т1,№4 - С 341-347

3 Москалев Е А Эпигенетика все ли закодировано в ДНК'' / Е А Москалев // Сборник статей по итогам ежегодной конференции «Философские проблемы биологии и медицины» - Воронеж -2004 -С 21-23

4 Попов В Н Методы молекулярно-биологических и генно-инженерных исследований Учебно-методическое пособие по специальности 020201(011600) -Биология / В Н Попов, А Т Епринцев, Е А Москалев - Воронеж Изд-во Воронежского университета, 2005 - 47 с

5 Moskalyov Е A Epigenetic profiling of B-cell chronic lymphocytic leukemia by using oligonucleotide microarrays / E A Moskalyov, V Beier, A T Eprmtsev, J D Hoheisel // Statusseminar Chiptechnologien Entwicklung, Forschung und Routine - Frankfurt am Main (2-3 February) - 2006 - P 59

6 Москалев E А Анализ паттерна метилирования геномной ДНК с помощью олигонуклеотидных ДНК-чипов / Е А Москалев, V Beier, J D Hoheisel, A T Епринцев // 10-я Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXIвека» -Пущино(17-21 апреля) -2006 -С 32

7 Moskalyov ЕА Development of array-based assay for high-resolution DNA-methylation profiling of B-cell chronic lymphocytic leukemia / E A Moskalyov, V Beier, A T Eprintsev, I A Vorobjev, E A Nikitin, J D Hoheisel // Second general meeting of alumni DKFZ - Heidelberg (12-13 May) -2006 - P 9

8 Москалев E А Изменения паттернов метилирования геномной ДНК при канцерогенезе разработка метода гибридизационного анализа на олигонуклеотидных чипах / Е А Москалев, А Т Епринцев, V Beier, И А Воробьев, Е А Никитин, J D Hoheisel // Организация и регуляция физиолого-биохимических процессов межрегион сб науч работ, посвященный памяти А А Землянухина -Воронеж ЦЧРкн изд-во -2006 -Вып 8 -С 141-154

9 Москалев Е А Разработка высокопроизводительного метода анализа паттернов метилирования геномной ДНК опухолевых клеток с помощью гибридизации на олигонуклеотидных чипах / Е А Москалев, А Т Епринцев, И А Воробьев, J

Hoheisel // XIX зимняя молодежная научная школа «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» - Москва (7-9 февраля), 2007 - С 42

10 Nikitin ЕА Expression level of lipoprotein lipase and dystrophin genes predict survival in B-cell chronic lymphocytic leukemia / E A Nikitin, S G Malakho, В V Biderman, A V Baranova, Y Y Lone, A Y Shevelev, M M Peklo, T N Vlasik, E A Moskalev, В V Zingerman, I A Vorob'ev, А В Poltaraus, А В Sudankov, A I Vorobjev //Leukemia and Lymphoma -2007 -V 48, №5 -P 912-922

11 Москалев E А Эпигенетический анализ онкогенных сигнальных путей активация пути Wnt в патогенезе хронического B-клеточного лимфолейкоза / Е А Москалев, А Т Епринцев, V Beier, Е А Никитин, И А Воробьев, J D Hoheisel // Организация и регуляция физиолого-биохимических процессов межрегион сб науч работ, посвященный памяти А А Землянухина - Воронеж ЦЧР кн изд-во — 2007 -Вып 9 - С 4-13

12 Москалев Е А Методы определения картины метилирования геномной ДНК при канцерогенезе от отдельных нуклеотидов к метилому / Е А Москалев, А Т Епринцев, J D Hoheisel//Молекулярная биология -2007 -Т 41, № 5 - С 793-807

Статьи № 1,2,12 опубликованы в изданиях, соответствующих списку ВАК РФ.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает глубокую признательность научному руководителю А Т Епринцеву за поддержку начинания с исследованием метилирования ДНК в опухолях и чуткое руководство, J D Hoheisel за возможность анализа метилирования Опухолевой ДНК на олигонуклеотидных чипах и финансирование данной серии экспериментов, И А Воробьеву и Е А Никитину, любезно предоставившим пробы крови больных и клинико-диагностические данные, за ценные советы по работе и плодотворное обсуждение стратегии исследований, а также Д В Василенко за терпеливые и компетентные ответы на мои дилетантские вопросы о медицинских аспектах онкологических заболеваний, научно-педагогическому коллективу кафедры физиологии и биохимии растений ВГУ

Особые слова благодарности В И Моисееву, познакомившему меня с новым взглядом на феномен жизни и патологии и более других оказавшему влияние на мое мировоззрение

Бесконечно благодарю мою семью и особенно маму за безоговорочную и постоянную поддержку на протяжении всего проекта, терпение и веру в успех

Искренне признателен В Н Попову, Л П Овчинникову, О Н Озолинь, М Ю Грабович, V Beier, О и М Скабкиным, N Tönisson, С Steinhoff, А Б Сударикову, Л К Воиновой, Т И Дедовой, С В Золотаревой, В Кузнецову, Я Сягайло, J Pullat, М Тутукиной, М Климовой, О Фоменко, Д Федорину, Ю Леоновой, Т П и В М Мининым, И М Каниной, А Гладких, Е Грицову, М Beier, A Thiel, С Busold, а также моим студентам-медикам - всем, без кого данная работа и её автор не могли состояться

Благодарен Германской службе академических обменов (DAAD) и Министерству образования и науки России за финансирование части работы

Поделиться с друзьями: