• Фадеева Ирина Валентиновна
  • 2004
  • 21

Разработка комплексного пробиотического препарата на основе лактобактерий автореферат диссертации для написания диплома, курсовой работы, тема для доклада и реферата

Разработка комплексного пробиотического препарата на основе лактобактерий - темы дипломов, курсовиков, рефератов и докладов Ознакомиться с текстом работы
Специальность ВАК РФ: 03.00.07 — Микробиология
  • Реферун рекомендует следующие темы дипломов:
  • Нормальной микрофлоры человека и основа пробиотических препаратов (обзор данных литературы)
  • Лактобактерии как основа пробиотиков
  • Реферун советует написать курсовую работу на тему:
  • Технологические аспекты производства пробиотиков на основе лактобактерий
  • Сравнительное изучение биологических
  • Реферун советует написать реферат на тему:
  • Биологические свойства штаммов
  • Антагонистическая активность штаммов
  • Реферун предлагает написать доклад на тему:
  • Реакторное культивирование лактобактерий
  • Выделение чистой культуры лактобацилл
  • Определение признаков патогенности
  • Ферменты патогенности и адгезивная способность лактобацилл
Поделиться с друзьями:

Выдержки из автореферата диссертации Фадеева Ирина Валентиновна, 2004, 03.00.07 — Микробиология

Актуальность проблемы. Вследствие несбалансированного питания, дефицита витаминов, микроэлементов, приема антибактериальных препаратов, а также под действием все увеличивающегося загрязнения окружающей среды потенциально опасными для живых организмов химическими соединениями происходит разрушение эволюционно сложившихся естественных микробиоценозов человека. Поскольку частота распространения дисбактериоза пищеварительного тракта среди россиян по некоторым оценкам достигает 90 %, очевидно, насколько важны исследования, направленные на создание препаратов, восстанавливающих микроэкологический баланс в организме (Грачева и др., 1999; Шендеров, 2002). Важная роль в лечении и профилактике дисбактериозов отводится пробиотикам, содержащим представителей нормальной микрофлоры человека, в том числе лактобактерии (Гуськова, 1996; Горовиц и др., 1999; Каширская, 2000; Шендеров, 2002). Последние широко представлены на слизистых открытых окружающей среде полостей организма и в значительной степени определяют функционалыгую активность микробиоценозов данных биотопов (Воробьев, 1999; Raibaud, 1998). Лактобактерии являются постоянным объектом исследований в микробной экологии человека. Практическое использование их положительных свойств иллюстрируется многолетним опытом изготовления и применения отечественных биопрепаратов (лактобактерин, ацилакт, аципол). Фактором, ограничивающим специфическую активность указанных пробиотиков, является содержание бактерий одного вида. Повышение и расширение спектра биологической активности лактосодержащих пробиотиков может быть достигнуто за счет разработки комплексных препаратов на основе специально подобранных бактериальных композиций, включающих совместимые штаммы разных видов. Создание препаратов многовидового микробного состава является наиболее перспективным подходом к бактериотерапии (Чупринина и др., 1998; Шендеров, 2001). Указанное направление исследований предполагает реализацию потенциала известных производственных штаммов лактобактерии - Lactobacillus plantarum 8P-A3, L fermentum 90T-C4, L. acidophilns К3Ш24, L. acidophilus ЮОаш, L. acidophilusNKi.

Клинические исследования открывают новые стороны позитивного воздействия лактосодержащих препаратов на физическое состояние человека. Это позволяет расширять сферу их применения (акушерство и гинекология, стоматология, дерматология

I вИБЛИОТЕКА |

необходимость создания лекарственных форм, адекватных новым способам аппликации и требованиям к потребительским свойствам препаратов (суппозитории, мази, кремы, порошки, капсулы, таблетки) (Поспелова и др., 1988). Исследования, направленные на разработку и усовершенствование технологий указанных фармакопейных форм препаратов на основе живых лактобактерий, являются актуальными для производства пробиотиков.

Цель настоящего исследования - изучение и реализация биологического и технологического потенциала известных производственных штаммов лактобактерий при конструировании комплексного пробиотического препарата.

Основные задачи исследования:

1. Провести сравнительное изучение биологических и технологических свойств производственных штаммов лактобактерий, используемых для изготовления отечественных лактосодержащих пробиотиков.

2. Сконструировать бактериальную композицию комплексного препарата с учетом совместимости и анализа совокупности биологических и технологических свойств производственных штаммов лактобактерий.

3. Разработать способ получения комплексного препарата и методы контроля его специфической активности.

4. Исследовать in vitro биологическую активность комплексного препарата в сравнении с аналогами.

5. Изучить возможность и особенности использования различных способов стабилизации бактериальных культур при изготовлении лекарственных форм лактосодержащих пробиотиков.

Научная новизна. На основе сравнительной оценки биологических и технологических свойств, а также с учетом совместимости производственных штаммов лактобактерий сконструирована бактериальная композиция и разработан способ получения комплексного пробиотика «Лактобактерин-БИЛС сухой», обладающего высокой биологической активностью. Изучено влияние различных ксеропротекторов на биологические свойства лактобактерий и технологические параметры лиофилизированной биомассы. Разработан способ получения лиофилизированной биомассы лактобактерий, пригодной для изготовления различных лекарственных форм (порошки, капсулы, мази, суппозитории и т.д.) пробиотиков, с использованием ксеропротектора, содержащего аэросил.

В качестве альтернативы лиофилизации разработан способ стабилизации жидкой бактериальной культуры Ь. р1аШагит 8P-A3, обеспечивающий длительное сохранение жизнеспособности клеток и пригодный для изготовления мягких лекарственных форм лактобактерина.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные расширяют представление о биологических и технологических свойствах производственных штаммов лактобактерий, позволяют оптимизировать методические подходы при конструировании бактерийных композиций комплексных пробиотиков. Результаты исследований свидетельствуют о возможности использования различных способов стабилизации бактериальных культур при изготовлении лекарственных форм пробиотиков. Установлена зависимость технологических свойств сухой лиофилизированной биомассы от состава защитной среды. Разработан и запатентован (Патент № 2200566 на изобретение РФ) состав и технология комплексного пробиотического препарата «Лактобактерин-БИЛС сухой» в виде сухой биомассы во флаконах. В рамках доклинической оценки биологической активности препарата выявлены его преимущества по сравнению с таковой аналогов (лактобактерина, ацилакта). Определены методы контроля специфической активности, предусматривающие раздельный количественный учет колоний-образующих единиц каждого компонента бактериальной композиции. Создан метод получения сухой бактериальной массы с биологическими и технологическими свойствами, удовлетворяющими требованиям крупносерийного производства различных лекарственных форм лактосодержащих пробиотиков. Указанный метод использован, в технологии производства новой лекарственной формы лактобактерина - «Лактобактерин порошок». На основе разработанного способа стабилизации жидкой бактериальной культуры получены препарат «Лактобактерин, суппозитории вагинальные», соответствующий требованиям Фармакопейной статьи, а также мазь с лактобактериями «Эмулакт» (Патент № 2183963 на изобретение РФ). Разработана нормативно-техническая документация на лактосодержащие препараты: Фармакопейная статья предприятия на препарат «Лактобактерин-БИЛС сухой», Фармакопейная статья предприятия на препарат «Лактобактерин, суппозитории вагинальные», «Лактобактерин-БИЛС сухой», Фармакопейная статья предприятия на препарат «Лактобактерин порошок», Экспериментально-производственный регламент «Лактобактерин-БИЛС сухой», Изменение №1 к регламенту производства «Лактобактерин в свечах», Регламент производства «Лактобактерин порошок», Инструкция по

применению препарата «Лактобактсрин-БИЛС сухой», Инструкция по применению препарата «Лактобактерин порошок».

Основные положения, выносимые на защиту

1. Биологическая активность разработанного нового комплексного препарата на основе лактобактерий (Ь. plantarum 8P-A3, Ь. acidophilns К3Ш24) существенно превосходит таковую препаратов-аналогов (лактобактерина, ацилакта).

2. Для получения сухой биомассы лактобактерий пригодной для изготовления различных лекарственных форм пробиотических препаратов целесообразно использование ксеропротектора, содержащего сахарозу, обезжиренное молоко и аэросил.

3. При изготовлении мягких лекарственных форм лактобактерина целесообразно применение способа стабилизации бактериальной культуры основанного на использовании стабилизирующей системы, включающей поверхностно-активные вещества и вещества, входящие в состав мазевых или суппозиторных основ.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов», Уфа, 2000; Научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы», Пермь, 2000; Международной научно-практической конференции «Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования», Москва, 2002; Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке», Пермь, 2003. Диссертационная работа апробирована на заседании- Научно-технического совета филиала ФГУП «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед».

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ. Полученные результаты исследования защищены 2 Патентами на изобретение РФ.

Объем и структура работы. Работа изложена на 155 страницах машинописного текста, содержит 34 таблицы и 7 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав экспериментальных исследований, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 262 литературных источника, из них 172 отечественных и 90 зарубежных авторов.

ВЫВОДЫ

1. На основе сравнительного изучения совокупности биологических и технологических свойств производственных штаммов лактобактерий, применяемых при изготовлении лактобактерина и ацилакта, сконструирована бактериальная композиция для комплексного пробиотического препарата, включающая штаммы L. plantarum 8P-A3 и L. acidophilus К3Ш24.

2. Разработан оригинальный способ получения комплексного препарата «Лактобактерин-БИЛС сухой», включающий унифицированный метод приготовления маточных культур и раздельное культивирование производственных штаммов. Предложен способ контроля специфической активности препарата, предусматривающий количественный учет каждого бактериального компонента композиции.

3. При изучении биологической активности комплексного препарата выявлены его преимущества по антагонистическим и адгезивным свойствам в сравнении с препаратами-аналогами: лактобактерином и ацилактом.

4. Впервые разработан состав ксеропротектора для лиофильного высушивания лактобактерий, позволяющий получать сухую биомассу бактерий с биологическими и технологическими свойствами, пригодными для изготовления различных лекарственных форм препаратов.

5. Разработан оригинальный способ получения мягких лекарственных форм (мазь, суппозитории) лактобактерина, включающий применение жидкой бактериальной культуры штамма Ь. р1аШагит 8Р-А3. Применение стабилизирующей системы, включающей вещества, входящие в состав мазевых и суппозиторных основ, обеспечивает сохранение жизнеспособности клеток лактобактерий.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Несчисляев В.А., Петров В.Ф., Молохова Е.И., Фадеева И.В., Чистохина Л.П. Мазь «Эмулакт» для лечения и профилактики инфекционно-воспалительных гинекологических заболеваний и дисбактериозов. Патент на изобретение РФ № 2183963. Заявка № 99117476. Приоритет изобретения 10.08.1999. Зарег. в Гос. реестре 27.06.2002.

2. Несчисляев В.А., Молохова Е.И., Фадеева И.В. Получение стабильной биомассы при изготовлении мягких лекарственных форм пробиотиков//В кн.: Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: Матер. Юбилейной межвуз. научно-практ. конф. - Пермь, 2000. - С. 168.

3. Несчисляев ВА, Молохова Е.И., Фадеева И.В., Чистохина Л.П. Мази на основе жидких бактериальных культур и кулътуральных жидкостей лактобацилл//В кн.: Человек и лекарство: Тез. докл. VII Рос. национального конгресса. - Москва, 2000. - С. 616.

4. Несчисляев ВА, Молохова Е.И., Фадеева И.В., Чистохина Л.П. Стабилизация бактериальной биомассы при изготовлении мягких лекарственных форм лактобактерина//В кн.: Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов: Труды. Всеросс. конф. - Уфа, 2000. - С. 188-190.

5. Фадеева И.В., Несчисляев В.А. Экспериментальные материалы к разработке комплексного пробиотика на основе лактобактерий//Х1У Коми Республ. молодежная научн. конф/. Тез. докл. - Сыктывкар, 2000. - С. 114.

6. Несчисляев ВА, Фадеева И.В., Чистохина Л.П. К вопросу разработки лекарственных форм пробиотиков//В кн.: Актуальные вопросы разработки,

производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов: Матер, научно-практ. конф. - Томск, 2001. - С. 54-55.

7. Фадеева И.В. Разработка технологии комплексного препарата на основе лактобактерий//В кн.: Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Матер. Межвуз. научно-практ. конф., посвященной 85-летию образования на Урале. - Пермь, 2001. - С. 137-138.

8. Поспелова В.В., Несчисляев В.А., Фадеева И.В., Ворошилина Н.Н., Чистохина Л.П., Канаева Е.Н. Лекарственные формы пробиотиков для местного применения, их разработка и перспективы исследованийУ/В кн.: Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования: Тез. докл. Междунар. научно-практ. конф. памяти Г.И. Гончаровой. - Москва, 2002. -СП.

9. Несчисляев ВА, Фадеева И.В., Арчакова Е.Г. Исследование штаммосовместимости лактобактерий при разработке технологии комплексного пробиотика/ЛГам же. - С. 70.

10. Несчисляев В.А., Фадеева И.В. Способ получения лактобактерина. Патент на изобретение РФ № 22005666. Заявка № 2001121098. Приоритет изобретения 26.06.2001. Зарег. в Гос. реестре 20.03.2003.

11. Несчисляев В.А., Молохова Е.И., Фадеева И.В., Тодер П.В. Влияние ксеропротекторов на технологические свойства сухой биомассы лактобактерий//В кн.: Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке: Матер. Всеросс. научн. конф. - Пермь, 2003. - С. 268-270.

12. Фадеева И.В., Несчисляев В.А. Биологические свойства препарата лактобактерин-БИЛС/ЛГам же. - С. 277-280.

13. Несчисляев ВА, Фадеева И.В. Сравнительное изучение биологических свойств нового комплексного пробиотика и препаратов-аналогов/УПермский медицинский журнал. - 2004. - N. . - С.

ФАДЕЕВАИрина Валент иновна

РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСНОГО ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ЛАКТОБАКТЕРИЙ

АВТОРЕФЕРАТ

Лицензия ПД-11-0002 от 15.12.99.

Поделиться с друзьями: