• Хисматуллина Наиля Анваровна
  • 2000
  • 45

Разработка средств и методов иммунологического мониторинга и мер борьбы при бешенстве и лихорадке КУ животных автореферат диссертации для написания диплома, курсовой работы, тема для доклада и реферата

Разработка средств и методов иммунологического мониторинга и мер борьбы при бешенстве и лихорадке КУ животных - темы дипломов, курсовиков, рефератов и докладов Ознакомиться с текстом работы
Специальность ВАК РФ: 03.00.07 — Микробиология
  • Реферун рекомендует следующие темы дипломов:
  • Теоретические основы контроля эпизоотического процесса
  • Реферун советует написать курсовую работу на тему:
  • Информационные технологии в эпизоотологии
  • Реферун советует написать реферат на тему:
  • Надежность системы в целом и ее подсистем
  • Реферун предлагает написать доклад на тему:
  • Изучение связи заболеваемости бешенством животных с плотностью популяции диких животных
  • Добровольцы - участники клинических испытаний
  • Подходы к формированию когорт добровольцев
  • Оценка безопасности и переносимости вакцины
Поделиться с друзьями:

Выдержки из автореферата диссертации Хисматуллина Наиля Анваровна, 2000, 03.00.07 — Микробиология

Актуальность темы. Несмотря на определенные достижения в изучении этио-югии, диагностики, профилактики, эпизоотологии и эпидемиологии зооаитропоноз-шх инфекций, таких как бешенство и лихорадка Ку, остаются не решенными и актуальными дальнейшая разработка и усовершенствование средств и методов иммунологического мониторинга и мер борьбы с ними.

В большинстве регионов России эпизоотическая ситуация по бешенству чрезвычайно сложна - резко активировались природные очаги этой инфекции, увеличи-юсь число случаев заболеваний среди диких плотоядных, домашних и сельскохозяйственных животных, отмечены случаи заболеваний людей с летальным исходом М.Г. Таршис, Н.А.Ковалев, П.П.Кузнецов и др., 1990; Г.С. Полюшкина, A.A. Горку-гов, 1998; В .А. Седов, И.Л. Бакулов, 1998; В.А. Ведерников и др., 1998; М.А. Сели->юв, 1987, 1998; Ю.М. Федоров и др. 1998). По данным ряда авторов (А.З. Равилов, \Х. Юсупов, В.А. Верхолетов, P.M. Ахметов, 1992; К.Н. Груздев, А.К. Груздев, 1997; З.М. Авилов, В.А. Седов, С.М. Коломыцев и др., 1998; В.И. Белоусов, 1998; А.З. Ра-шлов, H.A. Хисматуллина, Р.Х. Юсупов и др., 1999 и др.) научно обоснованные про-:'ивоэпизоотические и противоэпидемические мероприятия должны основываться на «учении особенностей краевой эпизоотологии этого зооантропоноза, а также свое-феменном выявлении возбудителя бешенства и изучении его биологических свойств.

Лихорадка Ку - одна из опасных зооантропонозов, продолжает оставайся важ-юй проблемой ветеринарии и медицины. Ее значение становится очевидным, если 'честь наличие массивных природных очагов инфекции в различных регионах Рос-:ийской Федерации; восприимчивость к ней человека, практически всех видов млс-сопитающих, птиц и клещей; образование антропоургических очагов; стойкость воз-»удителя к факторам внешней среды и разнообразие путей передачи. Учитывая бес-:имптомное течение болезни у сельскохозяйственных животных, важное значение фиобретает постановка достоверного диагноза с использованием современных мето-[ов исследований.

Применяемые в настоящее время средства и методы иммунологического мони-■оринга бешенства и лихорадки Ку имеют определенные недостатки: низкую чувст-иггельность и недостаточную специфичность (световая микроскопия и реакция пре-щпитации, реакция длительного связывания комплемента), длительность получения 1езультатов экспертиз и трудоемкость (биопроба и реакция нейтрализации на белых 1ышах). В связи с этим возрастает необходимость усовершенствования существую-ццх и разработки ускоренных методов и эффективных средств иммунологического юпиториига этих зооантропонозов.

В последнее время для лабораторной диагностики инфекционных болезней [редложен метод иммуноферментного анализа (ИФА). В специальной литературе меются, в частности, сообщения о применении иммунопероксидазной реакции для >бнаружения рабического антигена в патологическом материале и для оценки качсст-а антирабических вакцин (А. Д. Ботвинкин и др., 1987; В.В.Недосеков, Т.Ф.Вишняков и др., 1998; P.Atanasiu et al, 1982; P.Marel, A.Wezel, 1982 и др.), атак-<е - для обнаружения антигена возбудителя лихорадки Ку в органах больных людей И.В. Токаревич и др., 1988; E.IT. Горбачев и др., 1989; Н.К. Токаревич Н.К. и др., ^сСиЙжмГ 11ГРспекгишюсгь ИС||°льзования твердофазного ИФА для обна-

ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА

ружения антител в сыворотке крови людей, переболевших лихорадкой Ку и привить антирабическими вакцинами, а также у иммунизированных животных (А.Д. Ботви кип и др., 1986; АЛ. Бойко и др., 1987, Э.Я.Сазапова и др., 1988; 1997; Е.Ковачев 1989; P.Atanasiu et al, 1977, 1978; P.Sureau, 1979; K.Nicholson, A.Prestage, 198 L.Szkudlarek, 1982 и др.). Положительные результаты в этом отношении были пол чены при использовании метода выделения возбудителя бешенства в культуре клст< (А.Г. Татаров, М.А. Селимов и др., 1985, 1987; R.G. Rudd, C.V. Trimarchi, 1983; W., Webster, 1987 и др.), а также при изучении морфологических и биологачесю свойств возбудителя лихорадки Ку и его титровании (M.Arens, 1983; W.Schneidt 1989 и др.).

Метод флуоресцирующих антител (МФА) - один из наиболее точных методе микроскопической диагностики бешенства. В практике наиболее широкое при.мен ' ние получил прямой МФА (М.А.Селимов и др., 1964; ГОСТ 26075-84). В литерагу] имеются единичные сообщения о перспективности МФА для диагностики лихорадь Ку (Р.Б.Гольдин и др., 1977; Р.И.Ситдиков и др., 1989).

Как известно, эффективность МФА во многом определяется качеством антир бического глобулина и флуорохрома. В лабораториях нашей страны применяют гл! булины из сыворотки лошади (М.А. Селимов, Е.В. Клюева, 1966).

По данным литературы эффективными оказались флуоресцирующие airrirrej из антирабических сывороток хомяков и морских свинок (А.Д. Ботвинкин и др., 198 В.И. Белоусов и др., 1996 и др.). Однако для производственных целей использоваш хомяков и морских свинок менее приемлемо по экономическим соображениям.

Успешным в этом отношении оказалось и применение моноклональных aim тел (МКА), обладающих моноспецифичностью по сравнению с поликлональными ai тисыворотками и позволяющих проводить идентификацию штаммов рабического bi руса, в частности, дифференцировать серотипы группы бешенства (М.А.Селимов др., 1982, 1987, 1994; А.Д.Ботвинкин и др., 1989, 1990; И.В.Кузьмин и др., 1992, 1991 T.Wiktor el al.,1978, 1980; T.Wiktor 1979 и др.), а также выявлять фазовые различг между штаммами C.burnetii ( В.Себерзов и др., 1987; Е.В.Прохватилова и др., 199; Z.Williams, 1984; G.Scott, 1989 и др.).

Однако вопросы полног о и своевременного проведения мер борьбы и ироф! лактики в неблагополучных хозяйствах, совершенствования существующих и разр; ботка новых методов и средств иммунологического мониторинга бешенства и лих< радки Ку по-прежнему остаются важной проблемой вегеринарии и здравоохранения.

При этом, как показывает анализ литературы, наиболее перспективным являс ся использование культур клеток, применение МФА и ИФА, а также идентификащ: возбудителя бешенства и лихорадки Ку с помощью МКА.

Цель н задачи исследований. Цель исследования - разработать и ycoBepiuei ствовать средства и методы иммунологического мониторинга бешенства и лихорадк Ку; комплексное проведение эпизоотологического и иммунологического мониторш га в очагах рабической инфекции и лихорадки Ку и усовершенствовать меры борьб с этими инфекциями. В соответствии с целью работы были поставлены следующг задачи:

- изучить эпизоотолого-энидсмическую ситуацию по бешенству в Республика Татарстан (РТ) и Башкортостан (РБ) за период 1970-1999 гг. и 1974-1999 гг. соотвс ственно и выяснить роль разных видов живогных в сохранении рабического вируса биотопах;

- изучить антигенные и биологические свойства эпизоотических изолятов виру-1 бешенства, циркулирующих на территории Татарстана и Башкортостана;

- разработать и усовершенствовать средства и методы иммунологического мо-иторинга бешенства и лихорадки Ку;

- провести сравнительную оценку эффективности общепринятых и разработан-ых методов иммунологического мониторинга бешенства й лихорадки Ку;

- разработать нормативно-технические документы на созданные средства и ме-эды иммунологического мониторинга бешенства и лихорадки Ку и внедрить научно Зосноваиные рекомендации по усовершенствованию системы организационных и гециальных мероприятий по борьбе с бешенством и лихорадкой Ку.

Научная новшна. Впервые проведен ветерипарно-географичсский анализ аспространеиия бешенства на территории Татарстана и Башкортостана за 1970-1999 \ и 1974-1999 гг. соответственно, разработаны карты эпизоотологичсского райони-эвания территории республик и составлен краткосрочный прогноз энзоотии бешен-гва в РТ; изучены некоторые биологические свойства изолятов вируса бешенства, уделенные па территории РТ и РБ, и установлено их антигенное соответствие вак-инньш штаммам. Впервые разработаны наборы препаратов для обнаружения возбу-ятелей бешенства и лихорадки Ку экспресс-методами ИФА и МФА, выделением эзбудителя бешенства в культуре клеток иевриномы Гассерова узла крысы 1ГУК-1). Эти методы позволяют в более ранние сроки по сравнению с биопробой на глых мышах и с более высокой чувствительностью, чем РДСК обнаруживать спсци-ические антигены указанных возбудителей болезни в патологическом материале, ест в культуре клеток НГУК-1 по чувствительности не уступает ишрацеребральной «окуляции белых мышей. Кроме того, разработаны тест-системы, обеспечивающие мстрое выявление специфических антител в сыворотках крови, вакцинированных ротив бешенства и лихорадки Ку (патент РФ № 1824196 от 5.03.94 г.).

С помощью полного набора антинуклеокапендных МКА впервые идентифици-эваны штаммы вируса бешенства, циркулирующие на территории нашей страны, и ;тановлены их антигенные различия. Получены МКА к возбудителю лихорадки Ку птамм "Барабинский", 1 фазы), обеспечивающие межфазовую дифференциацию вбудителя болезни.

Практическая значимость. Результаты проведенных исследований вошли в пработанные и внедренные в практику нормативно-технические документы (см. п.п. 1 "Практические предложения").

Апробация результатов исследований. Основные положения диссертации эложены на: 1) Отчетных научных конференциях Всероссийского научно-;следовательского ветеринарного института (1983-1999 гг). 2) 10 региональных и :спубликанских научно-практических конференциях (Казань, 1984, 1987, 1992, )95-2000; Троицк, 1989; Киров, 1999). 3)4 Юбилейных научных конференциях (Ки-5в, 1998; Москва, 1998, 1999; Екатеринбург, 1999). 4) 7 Всесоюзных и Всероссий-сих научных конференциях и семинарах (Москва, 1985-1987; Львов, 1988; Влади-ир, 1995; Щелково, 1996). 5) 5 Международных научных конференциях и совещани-I (Москва, 1991; Воронеж, 1997; Казань, 1998, 2000; Покров, 1998). 6) 3 съездах (11о-юнбирск, 1992; Казань, 1995,2000).

Наборы препаратов для лабораторной диагностики бешенства и лихорадки Ку гтодами ИФА и МФА в 1991 и 1999 гг. экспонировались в павильоне "Ветеринария" ДНХ СССР и Всероссийского выставочного Центра и были отмечены серебряной

медалью (1991) и медалями Лауреата ВВЦ (1999).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликован* 110 научных трудов. Разработаны 5 наставлений, 5 инструкций, 5 технических уело вий, две рекомендации, санитарные правила. Получен патент РФ, выпущен информа ционный бюллетень.

Основные положения диссертации, выдвигаемые на защиту:

- характеристика эпизоотолого-эпидемиологической ситуации по заболеваемо сти бешенством в Татарстане и Башкортостане за 1970-1999 гг. и районирование тер ритории республик по степени распространения заболевания;

- анализ заболеваемости бешенством среди разных видов животных и их роль 1 развитии эпизоотического процесса;

- выделение и идентификация возбудителей бешенства и лихорадки Ку, изуче ние антигенных и биологических свойств изолятов рабического вируса;

- оценка эффективности общепринятых и разработка и усовершенствование средств и методов иммунологического мониторинга бешенства и лихорадки К} (МФА, ИФА, МКА и культуры клеток) на основе применения поли- и моноклональ-ных антител;

- иммунологический мониторинг бешенства и лихорадки Ку в хозяйствах, неблагополучных по данным заболеваниям;

- научно-теоретическое и практическое обоснование путей усовершенствования мероприятий но борьбе с бешенством и лихорадкой Ку с учетом эпизоотическое ситуации и результатов мониторинга.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 377 страницах к включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований (6 глав), обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и список использованной литературы (всего 822 источника, в том числе 299 иностранных). Диссертация иллюстрирована 68 таблицами, 4 схемами, 16 фотшрафиями и 29 рисунками. Приложения содержат 37 страниц.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Характеристика фауны и эпизоотического состояния по бешенству Республиках Татарстан и Башкортостан. С целью изучения эпизоотической о £ становки по бешенству в Республиках Татарстан и Башкортостан проводился анали данных ГУВ КМ РТ и РБ по эпизоотической ситуации за 1970-1999 гг и 1974-1999 г соответственно, а также эпизоотологическое обследование отдельных хозяйств, рай онов республик, расположенных в различных климатогеографических зонах РТ и РЕ с изучением связи ареала распространения бешенства с почвенно-биоклиматическим] факторами, дикой фауной с последующим картографированием неблагополучных ад министративных районов.

Татарстан занимает восточную окраину Русской равнины, примыкая на юге востоке к Уральской возвышенности. Долинами рек Волги и Камы территория Та тарстана делится на 3 части: Предволжье, Предкамье и Закамьс. На территории Рес публики Татарстан обитает 73 вида млекопитающих, 289 - птиц, 52 - рыб, 8 - ире смыкающихся и 11 земноводных.

Первые сведения о заболеваемости бешенством в Татарстане, по данным ГУ1 КМРТ, зарегистрированы в 1934 г, когда эта инфекция была отмечена в 2 населенны; пунктах Агрызского района у 11 животных, в том числе у 6 собак в г.А1рыз и 5 го; крупного рогатого скота (к.р.с.) в дер.Иж-бобья.

Системный анализ эпизоотической ситуации за период 1970-1999 гг показал что РТ неблагополучна по заболеваемости бешенством. Так, за указанный период бешенство в республике зарегистрировано в 40 районах, 6 городах, 633 населенны? пунктах и у 1109 животных. Следует отметить, что заболевание бешенством регистрируется ежегодно за исключением 1979, 1980 и 1984 гг. Эпизоотическая обстановке по бешенству была наиболее тяжелой в 1976 г, когда эта инфекция охватила 12 районов республики из 39 (бывших) с общим количеством заболевших животных 198 голов. Тяжелая обстановка сложилась и в 1996 г, когда эта болезнь была зарегистрирована в 22 районах из 43 (имеющихся в настоящее время), 86 населенных пунктах и у 104 животных. В 1999 г бешенство зарегистрировано в 19 районах, 113 населенных пунктах и у 146 животных.

Рост доли неблагополучных пунктов и напряженности эпизоотической ситуации за последние три года по сравнению с периодом 1994 -1996 гг составили для Бав-линского района - в 5,4 и 5,4 раза, Бугульминского - в 2,0 и 1,0 раза, Лениногорского

- в 4,3 и 8,4 раза, Ютазииского в 6,3 и 6,3 раза. В то же время отмечается спад доли неблагополучных пупктов и напряженности эпизоотической ситуации за последние три года по сравнению с периодом 1994-1996 гг для Азнакаевского района - в 1,6 и 1,1 раза, Алькеевского - 3,7 и 5,3 раза, Мснзелинского - в 6,5 и 9,8 раза, Тстюшского

- в 6,0 и 4,5 раза и т.д.

Следует отмстить, что за период 1970-1999 гг бешенство в РТ зарегистрировано как в сельской местности, так и в городах республики: Казани (1993, 1994, 1996, 1998 и 1999), Азнакаево (1993), Набережных Челнах (1994, 1995), Чистополе (1994),

Лениногорске (1996), Заинске (1998). В эти годы отмечено 4 случая гидрофобии (1977, 1982, 1985 и 1994), из них в двух случаях источником возбудителя болезни были лисицы, в остальных - волк и собака.

Анализ распространения бешенства среди различных видов животных за период 1970-1999 гг показал, что оно регистрируется среди различных видов диких, домашних и сельскохозяйственных животных. При этом среди сельскохозяйственных животных бешенство установлено в 622 случаях, в том числе в 486 - у крупного рогатого скота, что составило 43,8% от всех заболевших животных, 110 - у овец (9,9%), 25 - у лошадей (2,3%), 1 - у свиней (0,09%). В указанный период болезнь зарегистри-эована также у 128 домашних животных, в том числе у 80 собак (7,2%) и 48 кошек '4,3%). Бешенством болело также 359 диких животных, в том числе лисицы - 334 '29,9%), хомяки - 7 (0,6%), барсуки - 5 (0,5%). Кроме того, в единичных случаях за-золевание бешенством регистрировалось в различные годы у лосей - 4, енотовидных ;обак - 3, волков - 2, рыси - 2, ондатры - 1, косули - 1. При этом основным источни-сом и распростраштгелем бешенства в республике являются лисицы, на долю кого->ых среди заболевших диких животных приходится 93,0%.

Таким образом, анализ распределения заболеваемости бешенством среди раз-[ичных видов с.-х., диких и домашних животных показывает, что по зараженности гервые позиции занимают крупный рогатый окот - 43,8%, лисы - 30,1% и собаки -',2%.

Географическое положение Республики Башкортостан (Р1>) определяется коор-[ипатами 51°31' и 56°25' северной широта и 53°10' и 60°00' восточной долготы. Запад-гая, наибольшая часть ее территории относятся к Европе, а восточная, находящаяся за ребтом Урал-Тау - к Азии. По данным Министерства по природным ресурсам и ох-аны окружающей среды, на территории Республики Башкортостан обитает 77 видов [лекопитающих, 287 - птиц, 42 - рыб, 10 - пресмыкающихся, 10 - земноводных, 15 ыс. насекомых, 121 вид моллюсков.

Первые сведения о заболеваемости бешенством животных, полученные из ар-ивных документов Земского ветеринарного отдела Республики Башкортостан, заре-истрированы в 1900 г, когда эта инфекция была отмечена в 49 пунктах у 126 живот-ых. Из этих же документов следует, что в 1928 г бешенство установлено в 275 пупках и у 468 животных. Эпизоотическая ситуация по бешенству в Башкортостане была гсьма напряженной в 1953 г, когда эта инфекция охватила 40 районов республики из б, с общим количеством заболевших животных - 814 голов. В 1966 г заболеваемость ешснством зарегистрирована у 456 животных и далее, начиная с 1974 г, регистриру-гся ежегодно у с.-х., диких и домашних животных. За период 1974-1999 гг количест-э неблагополучных районов варьировало от 2 до 44, количество неблагополучных у'иктов - от 20 до 261. За указанный период бешенство установлено у 3846 живот-ых, из них доля с.-х. животных от общего количества зараженных составила. 55,2% 1121 гол.); диких - 25,6% (985 гол.), домашних - 19,2% (740 гол.).

За 6 мес. 2000 г бешенство установлено среди с.-х. животных у к.р.с. в 3-х слу-1ях, что составило 42,8% от всех заболевших, домашних - у 2-х собак (28,6%) и диве - у 2-х лисиц (28,6%).

За период 1994-1996 гг показатели индекса эпизоотичности и напряженности шзоотической ситуации возросли по сравнению с периодом 1988-1990 гг для Бир-:ого района соответственно в 2,8 и 8,1 раза, Бакалинского - в 5,1 и 23,5 раза, Куюр-зинского - в 2,3 и 4,6 раза, Бижбулякекого - в 10,8 и 21,7 раза. В то же время для

Бурзянского района эти показатели составили соответственно 0,3 и 0,03 и ситуация пс бешенству за исследуемый период оставалась стабильной.

Следует отметить, что бешенство в РБ регистрировалось как в сельской местности, так и в городах республики: Уфе, Мелеузе, Октябрьске, Бирске, Кумертау. Благовещенске и др. Анализ данных показ аз также, что за период 1966-1999 гг имелс место заболевание бешенством у людей. Установлено 13 случаев гидрофобии: в 1966 -2 случая, 1967- 1, 1970- 1, 1971 - 1, 1975 - 1, 1992-2, 1993 - 1, 1996-2, 1997-2. Основными источниками зарал<ения людей, по анамнестическим данным, явились собаки, лисы и кошки.

В период 1974-1999 гг бешенство регистрировалось у 3846 различных видов животных. При этом среди с.-х. животных заболевание установлено в 2121 случае, в том числе 1521 - у к.р.с. (39,5%), 369 - у овец (9,6%) 222 - у лошадей (5,8%), 9 - у свиней (0,2%). В указанный период бешенство регистрировалось у домашних животных, в том числе у 605 собак (15,7%) и у 135 кошек (3,5%). В эти годы бешенством болело 985 диких животных, в том числе лисицы - 903 (23,5%), волки - 14 (0,4%), лоси - 9 (0,2%), барсуки - 13 (0,3%), рыси - 7 (0,2%), енотовидные собаки - 9 (0,2%). Кроме того, в единичных случаях заболевание бешенством регистрировалось в различные годы у косуль, хорьков, куницы, ондатры, корсака, медведя и крыс.

Таким образом, анализ распределения заболеваемости бешенством среди различных видов с.-х., диких и домашних животных в РБ показывает, что по зараженности первые позиции занимают к.р.с. - 39,5%, лисы -23,5% и собаки - 15,7%.

Из приведенных данных следует, что несмотря на обширный круг животных, втянутых в эпизоотический процесс рабической инфекции в Республиках Татарстан и Башкортостан, лисица занимает главную роль в резервации и распространении инфекции (93,0% и 91,7% от заболевших диких животных соответственно).

Другие дикие хищники, такие как барсуки, куницы, рыси и т.п., по видимому, не поддерживают в своих популяциях бешенство при отсутствии болезни у основного хозяина, но они могут играть важную роль наряду с лисицей в передаче болезни диким травоядным, домашним животным и человеку. В то же время источниками и распространителями являются также бродячие и безнадзорные собаки и кошки, которые занимают значительное место среди общего количества заболевших животных.

При этом сельскохозяйственные животные, несмотря на высокую инфициро-ванность (43,8% от общего количества зараженных животных в РТ и 39,5% для РБ), являются биологическим тупиком для данной инфекции.

Возникновение случаев бешенства в последние годы в городах республики свидетельствует о синашропизации лисицы, которая явилась источником заболеваемости и домашних животных.

Характеристика территориальной приуроченности вспышек бешенства, картографирование неблагополучных пунктов. При классификации природных очагов бешенства Р.Л.Канторович (1968) рекомендует учитывать их ландшафтную приуроченность. Выделяя отдельный природный очаг бешенства, Г.Б.Мальков (1981) в числе характеризующих его признаков также называет привязанность к определенным элементам ландшафта.

В связи с этим, одной из важных задач, поставленных перед нами, было изучение территориальной приуроченности вспышек болезни и картофафирование неблагополучных пунктов в РТ и РБ.

Нами выявлено, что из 43 районов РТ за период 1970-1999 гг заболевание бе-

шенством встречается в 41. Проведено разделение районов по степени напряженности эпизоотической ситуации на 4 условные ipynribi:

- первая группа - наиболее опасная зона, где за 1970-1999 гг показатель степени напряженности эпизоотической ситуации (W) варьировал от 0,068 до 0,656. В данной зоне за указанный период регистрировалось от 18 до 101 неблагополучных по бешенству пунктов в 11 административных районах РТ: Азнакаевский (101), Бавлинскнй (50), Лениногорский (45) и др.;

- вторая группа - средняя зона, для которой показатель W был в пределах от 0,010 до 0,056. В средней зоне за 1970-1999 гг. заболевание регистрировалось от 5 до 16 неблагополучных пунктов в 13 административных районах: Мензелинский (16), Лаишевский (14), Тюлячинский (14) и др.;

- третья группа - слабая зона, где показатель W был менее 0,010. В этой зоне за указанный период регистрировалось от 1 до 9 неблагополучных населенных пунктов в 16 административных районах: Кукморский (9), Арский (7), Елабужский (7) и др.;

- четвертая группа - благополучная зона, к ней отнесены 2 административных района (А1рызский и Кайбицкий), где за последние 30 лет случаев бешенства среди дикой фауны, с.-х. и домашних животных не были зарегистрированы.

Следует отметить, что большая часть районов первой группы эпизоотической напряженности расположены в зоне Закамья, локализующиеся в юго-восточной части РТ, такие как: Азнакаевский, Актанышский, Бавлинскнй, Бугульминский, Лениногорский и др., а меньшая часть - в зоне Предкамья: Мамадышский и Сабинский районы, а также центральной части РТ - Чистопольский район.

Стационарно неблагополучными являются районы, расположенные в юго-восточной части Закамья, на Бугульминско-Белебеевской возвышенности и представляют "ядро" природного очага бешенства в республике, которое сформировавшись в 70-80 гг., стало причиной продвижения эпизоотической волны в центральные и северные части Татарстана. В указанных зонах леса в основном широколиственные, много березняков и осинников, где создаются благоприятные условия для размножения мышевидных грызунов - основы кормовой базы лнсиц. Кроме того, следует отметить о возможном трансграничном переносе возбудителя болезни на территорию Татарстана из приграничных с ней неблагополучных по бешенству районов Республик и областей. Так, по данным ДВ МСХ РФ за последние 2 года в РБ зарегистрировано 655 случаев бешенства в 484 населенных пунктах; в Оренбургской области - у 402 раз-шчных животных в 292 населенных пунктах, Чувашской Республике - у 13 животных в 12 населенных пунктах, Самарской области - у 157 животных в 146 населенных тунктах, а также в Ульяновской области, где заболело 57 различных видов живот-гых, в том числе 7 собак, 5 кошек и 27 диких животных в 53 населенных пунктах.

■ Таким образом, Республика Татарстан находится в "осадном" окружении неблагополучных по заболеваемости бешенством республик и областей.

Нами выявлено, что из 54 районов РБ за 1970-1999 гг заболевание бешенством ¡стречается в 50. Результаты изучения эпизоотической ситуации по бешенству в раз-эезе районов и географических зон РБ показали неравномерность его распространены. При этом на основе рассчета индекса эиизоотнчности и W выявлены районы с ¡ысокими, средними и низкими значениями названных показателей. На основании фоведенного эпизоотологического анализа распространения бешенства нами состав-гена кар га-схема районирования территория республики, которая включает 4 зоны: - первая, наиболее опасная, п которую входят 15 административных районов

республики, где в период с 1988 по 1999 гг бешенство регистрировалось от 40 до ЮС и более пунктов. К ним отнесены следующие районы: Куюргазинский, где бсшенствс установлено в 114 пунктах; Бижбулякский - 114, Бирский - 77, Бакалинский - 56 и др. Показатель "V/ для этой группы районов варьировал от 0,057 до 0,850;

- вторая, зона средней степени опасности, в которую входят 18 районов, где за указанный период заболевание регистрировалось от 20 до 40 пунктов. Это такие районы, как Стсрлибашевский - 33, Илишевский - 31, Кармаскалинский - 25 и др. Показатель колебался от 0,029 до 0,057;

- третья, зона со слабой степенью опасности, в которую отнесены районы, где бешенство регистрировалось за исследуемый период от 1 до 20 пунктов. К этим районам относятся Нуримановский, Архангельский, Белокатайский и др. Для этой зоны \У был менее 0,029.

К четвертой зоне отнесены районы (Белорецкий, Мечетлинский, Дуванский, Кигинский), где за последние десять лет и более случаи бешенства среди животных не регистрировались. Следует отметить, что большая часть районов с наибольшей по-раженностыо, такие как Зианчуринский, Куюргазинский, Федоровский, Мелеузский, Бишбулякский и др. (группы № 1 и 2), локализуются в степной и лесостепной зонах юго-западной, северо-западной, а также юго-воешчной частях РБ. Для данных территорий характерен пересеченный рельеф, где открытые пространства перемежаются с открытыми перелесками, рощами, холмами и оврагами и созданы благоприятные условия для обитания лисиц, способствующие росту ее численности.

Кроме того, следует отметить о возможном трансграничном переносе возбудителя болезни в указанные районы Башкортостана из приграничных с ним неблагополучных по бешенству территорий. Так, по данным ДВ МСХ РФ, за период 1998-1999 гг число неблагополучных по заболеваемости бешенством населенных пунктов и количество заболевших животных составили для Удмуртской Республики - 6 и 7; РТ -201 и 250; Свердловской области - 47 и 54; Челябинской области - 99 и 113; Оренбургской области - 292 и 402 соответственно.

В районах РБ, расположенных в северо-восточной части республики, таких как Белокатайский, Салаватский, Нуримановский, Архангельский, Гафурийский и др. установлены единичные случаи бешенства, а в районах: Белорецкий, Дуванский, Мечетлинский и Кигинский за последние 10 лет бешенство не регистрировалось. Это обстоятельство связано, по-видимому, с отсутствием благоприятных условий обитания лисиц - основного резервуара и источника вируса бешенства, в горных и лесистых местностях.

Таким образом, но показателям степени эпизоотической напряженности нами проведено территориальное районирование с последующим картографированием неблагополучных районов РТ и РБ. Выделенные эпизоотические районы первой, второй и третьей группы характеризуются соответствующим риском заражения человека и животных.

Выяснение зон повышенного риска распространения болезни позволяет уточнять оптимальные масштабы и сроки профилактической вакцинации животных, своевременно регулировать численность диких животных и вести борьбу с бродячими собаками. Естественно, что величина риска заражения, как и границы эпизоотических районов, непостоянны во времени и находятся в зависимости от состояния заболеваемости бешенством, а также от полноты и качества проведения иротивоэпизоотиче-ских мероприятий.

Оценка эпизоотической ситуации по бешенству среди животных в Татар-:тане н Башкортостане но годам и сезонам года. При характеристике эпизоотиче-:кой ситуации по годам и сезонам года мы исходили из того известного положения, гго для каждой конкретной территории периодичность проявления бешенства живот-1ых не одинакова и она связана, прежде всего с экологией носителей вируса. Биоло-ический цикл активности источников вируса и региональные особенности мест их >битания обуславливают сезонные колебания заболеваемости бешенством среди жи-ютных.

Анализ статистических данных по заболеваемости животных бешенством в РТ с 1970 по 1999 гг) и РБ (с 1974 по 1999 гг) указал на периодичность в проявлении нзоотий, характеризующаяся подъемом и спадом в отдельные годы. В целом, за ис-ледуемый период наблюдается закономерное проявление энзоотий, характеризуются 3-5-летней периодичностью в РТ и 2-3-лстней - в РБ. Эта закономерность про-вляется и в отношении отдельных видов как сельскохозяйственных, диких, так и до-[ашних животных.

Установлено, что в годы подъема заболеваемости в целом, постоянно отмеча-ось значительное повышение заболеваемости среди диких животных. Например, в 976 г диких животных в РТ заболело в 11,5 раза больше по сравнению с 1975 г. Та-ой рост заболеваемости среди диких животных, главным образом лисиц, совпадал с одъёмом энзоотии среди крупного и мелкого рогатого скота. Кроме того, анализ анных показал, что увеличение заболеваемости среди лисиц сопровождалось подье-ом заболеваемости в 2-10 раз у собак и кошек, особенно в последние годы (1990399 гг).

I (икличность энзоотий бешенства в Татарстане и Башкортостане связана, глав-ым образом с биологией лисиц - главного резервуара и распространи геля рабиче-сой инфекции в республиках.

Анализ данных заболеваемости среди животных по сезонам года за исследуе-ый период показал, что в РТ и РБ имеет место сезонные колебания проявления бе-енства у животных. При этом максимальное количество больных бешенством жи-ггных в РТ регистрируется в весенние месяцы - 33,8% (март - 14,2% и апрель -!,1%), на зимние месяцы приходится -31,3% (январь - 12,0% и февраль - 10,2%), на :ешше - 20,9% (ноябрь - 10,9%). За период 1984-1999 гг максимальное количество шьиых бешенством животных в РБ регистрировалось в зимние месяцы - 45,9%; на осенние и осенние месяцы года приходилось - 32,5% к 14,6% соответственно. Ми-шальное количество заболеваемости животных в РТ и РБ регистрировалось в лет-1е месяцы - 14 и 7% соответственно.

Необходимо отметить, что сезонные проявления заболеваемости бешенством еди диких, сельскохозяйственных и домашних животных в отдельности имеют об-ие тенденции.

Сезонность болезни должна учитываться при проведении массовой вакцинации льскохозяйственных и домашних животных. Массовую иммунизацию собак в ссль-ой местности целесообразно проводить в осенние месяцы. При этом период макси-1лыюй напряженности иммунитета совпадает с сезонным подъёмом энзоотии. По 1ению В.А. Ведерникова и В.Д. Седова (1988), потери от бешенства снижаются при оведении вакцинации сельскохозяйственных животных за месяц до выгона их на благополучные пастбища. Но в случаях размещения животных на зиму в приспо-бленных помещениях или на открытых откормочных площадках следует планиро-

вать осеннюю иммунизацию.

В эти же сроки необходимо предусмотреть вакцинацию молодняка и взрослого скота, принадлежащего населению, так как в эпизоотическом очаге практически невозможно предусмотреть место возможного нападения бешеных диких плотоядных на с.-х. животных.

Изучение взаимосвязи между показателями заболеваний бешенством животных и плотностью популяций дикой фауны, а также структурой почв в Республике Татарстан. Важнейшее эпизоотологическое значение для прогнозирования распространения бешенства имеет представление о волнах численности популяции, установленных С.С. Четвериковым (1905). Она зависит, во-первых, от колебаний внешних по отношению к популяции биотических и абиотических факторов. Во-вторых, для колебаний численности большое значение имеют и факторы, связанные с характеристиками самой популяции, например, плотностью особей (М.Г. Таршис, H.A. Ковалев, П.П. Кузнецов, 1990). В то же время миграция животных неоднородна и зависит от множества параметров: структуры почвы, покрова, направления склонов и т.д. (J.M.David, 1981). В связи с вышеизложенным, на следующем этапе исследований изучали связь между показателями заболеваний бешенством среди животных и плотностью популяций диких животных, а также структурой почв в РТ.

Несмотря на обширный круг животных, втянутых в эпизоотический процесс рабичсской инфекции в РТ (лисицы, волки, лоси, косули, рыси, барсуки, хомяки, енотовидные собаки), лисица играет главную роль в резервации и распространении инфекции. На долю лисиц за период 1970-1999 гг среди заболевших диких животных приходится 93,0%.

По данным Управления охотничьего хозяйства РТ численность лисицы в годы подъёма эпизоотии бешенства в республике несколько превышала таковую в годы ее спада. Так, численность лисицы в годы подъема энзоотии варьировала от 4,2 тыс. гол. (1981 г) и 5,7 тыс. гол. (1999 г.) до 13,23 тыс. гол. (1976 г), тогда как в период спада -численность лисиц составляла от 3,5 тыс. гол. (1984 г) до 5,47 тыс. гол. (1997 г). Анализ данных по зимнему маршрутному учету отдельно по районам РТ за 1998 г показал, что высокая плотность популяции лисиц приходится на некоторые неблагополучные районы: Сабинский (4,63 гол. на тыс. га); Тюлячинский (3,03 гол. на тыс. га); Елабужский (6,92 гол. на тыс. га); Лаишевский (6,72 гол. на тыс. га).

Заслуживает внимания связь между неблагополучием районов по данной инфекции и плотностью популяции барсука, норки и сурка. Так, максимальная плотность этих животных приходится на некоторые неблагополучные районы республики, такие как Азнакаевский, где максимальная плотность зарегистрирована у барсука, норки и сурка (более 1,73 гол. на 1000 га угодий; 4,23 и более гол. на 10 км русла рек и озера; более 166 гол. на 1000 га угодий соответственно), Лаишевский и Чистопольский - у норок, Лениногорский - у сурков. Вместе с тем, в свободных от бешенства районах республики (Агрызском и Кайбицком) концентрация численности этих животных минимальная.

Нами установлено, что наибольшее количество неблагополучных пунктов в административных районах регистрируется на территориях с преобладанием черноземных почв. Определена взаимосвязь между количеством неблагополучных пунктов за период 1970-1999 гг на 100 кв км и долью чернозема. В таких районах, как Азнакаевский, Бу1ульминский, Лениногорский, Муслюмовский, Чистопольский и др., расположенных в зоне Закамья, доля чернозема варьирует в пределах - 46,7-89,1%. У ка-

анные районы расположены на Бугульминско-Белебеевской возвышенности и небла-ополучны по заболеваемости бешенством на протяжении 1970-1999 гг. В районах, де доля чернозема мала, также отмечены случаи бешенства, что связано с миграцией ,шшх животных, главным образом лисиц. Таким образом, установленная прямая кор-еляция между количеством неблагополучных пунктов за период 1970-1999 гг и до-ей чернозема в административных районах указывает на благоприятные условия для битания лисицы в стационарно-неблагополучных районах РТ.

Анализ эпизоотолого-эпидемиологической ситуации по бешенству в 'еспублнках Татарстан н Башкортостан за последние годы и мер борьбы с ним. 1ути усовершенствования противоэпшоотнческнх мероприятий. В последние оды (1994 - 1999 гг) обстановка по заболеваемости бешенством в РТ остается [апряженной. За указанный период бешенство зарегистрировано в 39 районах, 377 :аселенных пунктах, 5 городах. За последние 6 лет по сравнению с предыдущим ериодом (1970 - 1993 гг) отмечена тенденция увеличения заболеваемости среди исиц в 5,9 раза, собак и кошек в 6,2 и 7,4 раза соответственно, что свидетельствует б активизации как природных, так и антропоургических очагов рабической нфекции. За период 1970-1999 гг установлено 4 случая гидрофобии (1976, 1982, 1980 : 1994), из них в 2-х случаях источником возбудителя болезни были лисицы, в стальных - волк и собака. Последний случай гидрофобии отмечен в 1994 г в 1абережных Челнах. Источником укуса была бешеная собака. Пострадавший за нтирабической помощью не обратился и вскоре скончался. Несмотря на это, случаев аболевания людей бешенством в настоящее время не отмечается, благодаря апряженной и целенаправленной антирабической деятельности, которую существляют работники органов и учреждений здравоохранения совместно с аиитарно-эпидемиологической и ветеринарными службами.

В 1994 г число лиц, получивших укусы, ослюнения животными и обративших -я за медицинской помощью составило 11990 чел, показатель на 100 тыс. населения оставил 319,4. Среди них 40 чел пострадало от диких животных, 46 чел - от живот-ых с установленным клинически или лабораторно диагнозом бешенства. Анализ гих показателей за период 1994-1999 гг вызывает тревогу, так как из года в год отучается их увеличение. Так, если показатель обращаемости населения за антираби-еской помощью в 1994 г принять за 100%, то в 1995 г этот показатель составил 04,7%, в 1996 г - 117,1%, в 1997 г -114,5%, в 1998 г - 121,7%, в 1999 г - 133,9%, по-градавшие от диких животных составили в 1995 г-257,5% (относительно 1994г), в 996 г - 402,5%, в 1997 г - 305%, в 1998 г - 692,5%, в 1999 г - 820,0%, а пострадавшие т животных с установленным диагнозом бешенства соответственно: 132,6%, 136%, 13%, 765,2% и 1076%.

Вызывает тревогу факгы отказов от прививок и самостоятельного прекращения х на территории республики, где в анализируемый период (1994-1999 гг) зарегист-ировано 495 случаев бешенства животных. Если в 1994-1995 гг самостоятельно ире-ращали или отказались от вакцинации от 9,6 до 12,2% вакцинируемых, то в 1999 г -,9% (1076 чел). В связи с этим, по данным ГК СЭН РТ проводится санпросветработа, том числе ежегодные семинары с хирургами Минздрава, выступления в газетах и р. Так, в 1999 г прочитано лекций -1512, проведены выступления по радио и телеви-ению - 279, в том числе - 27 по ТВ, выпущено санбюллетеней - 182, поддерживаются онтакты с Управлением охотничьего хозяйства при КМ РТ и МВД. С 1995 г в Рес-ублике Татарстан для вакцинации людей повсеместно применяется культуральная

очищенная концентрированная вакцина (КОКАВ), в неблагополучных районах про филактичсски иммунизируются лица групп повышенного риска заражения: охотники ветеринарные работники, лесники, собаководы и т.д. В городах республики создань консультативно-методические антирабические центры.

Анализ данных показывает, что среди лиц, обратившихся за антирабическо! помощью в 1998-1999 гг в 90,6% случаях отмечались контакты с домашними живот ными и лишь 2,2% - с дикими. Среди домашних животных причиной обращения з; антирабической помощью домашние собаки составляли 52,3%, кошки - 8,8%, безнал зорные собаки и кошки - 38,9%. В группе с.-х. животных на к.р.с. приходится 85, всех повреждений, полученных пострадавшими, др. с.-х. животных - 14,5%; в групп* диких животных на лисиц приходится 64,3%. Особого внимания заслуживает такж< высокая обращаемость населения гю поводу контактов с мышевидными грызунами которая составила 20,5%. Количество пострадавших от волков составила 1,4%, сг прочих видов (ондатр, ежен, обезьян и барсуков) - 12,7%. Таким образом, в республи ке создается постоянная угроза заражения людей и животных.

В целях недопущения ухудшения обстановки по бешенству Госкомитетом сан эпиднадзора совместно с ГУВ КМ РТ в 1994 г разработаны инструктивные указания I программные документы по профилакгике и эпизоотолого-эпидсмиологическом! надзору за бешенством, утвержденные совместными приказами. Издано совместное Постановление Главных госсанитарного врача и встинспектора РТ № 2 от 10.02.99 ] "О неотложных мерах по борьбе с бешенством в РТ". Разработан проект новых "Пра вил содержания собак и кошек в городах и других населенных пунктах РТ". Принятс Постановление КМ РТ № 403 от 22.05. 96 г, предусматривающее проведение в пол ном объеме специфических мер профилактики районными и городскими службам! республики в соответствии с "Комплексным планом мероприятий по профилактике бешенства в РТ на 1996-2000 гг." Для выполнения данного плана задействованы вс( Министерства, ведомства, практические учреждения и организации, ответственные з; благополучие по данной инфекции.

Согласно этому плану в районах и хозяйствах республики, неблагополучных пс бешенству, ветеринарной службой организованы профилактические вакцинации с.-х животных, охотничьих, служебных и хозяйственных собак. Службами других ведомств проводятся мероприятия по отлову и ликвидации собак и кошек, а также отстрелу лисиц и волков. Так, за период 1995-1999 гг. в республике иммунизироваж 94560 гол. с.-х. животных. Па базе Казанского горгосвет. объединения за перио; 1997-1999 гг. профилактически вакцинировано 26823 гол. собак и кошек. Ежегодно проводится наблюдение за животными, покусавшими людей. Только в 1999 г. под на блюденисм находилось 5131 животное.

Анализ противоэпизоотичсских мероприятий в наиболее неблагополучных ш бешенству районах Татарстана показал, что существующая система вынужденной \ частичной вакцинации не дает результата и приводит к кратковременному успеху I борьбе с заболеванием. Так, по данным ГУВ КМ РТ в 1998 г. в неблагополучны? районах республики вынужденной вакцинации подверглось лишь 0,01-13,4% к.р.с. I 0,1-57,1% - м.р.с. Поэтому в наиболее неблагополучных районах республики необхо димо рассмотреть вопрос о поголовной вакцинации к.р.с., собак и кошек в течение 3 5 лет. Эти мероприятия должны планироваться с учетом современной сезонности бе шенства и степени риска возникновения вспышек болезни.

В системе противоэпизоотических мероприятий Управлением охотничьего хо

шства при KM PT проводится регулирование численности дикой фауны и отстрелу езнадзорных собак и кошек. Так, в охотничьих угодьях Татарстана за период ноябрь 997 - март 1998 г отстреляно бродячих собак - 8741 гол, лис - 649, волков - 27. Толь-о в 1998-1999 гт в РТ отловлено и уничтожено 86259 гол бродячих животных, в том исле собак - 63877, кошек - 21419 и 963 лис. В 1999г было создано 275 постоянных и ременно действующих бригад по отлову и отстрелу бездомных собак, т.е. на 78 бри-зд больше, чем в 1998 г. За нарушение Правил содержания собак на их владельцев аложено 32 штрафа.

Анализ проводимых мероприятий в РБ в целом убедительно показывает, что есмотря на ряд принятых специфических и общих противоэпизоотических мер лучшений эпизоотического состояния в РБ по бешенству животных не достигнуто, [ри этом инфекция в отдельных районах, особенно лесостепной и степных зонах, меет значительное распространение. Только лишь в 1996 г бешенство установлено в 4 пунктах и 16 районах, в т.ч. - случай гидрофобии с летальным исходом в деревне 'таро-Базаново Бирского района. Увеличилось количество людей, обратившихся за нтирабической помощью с 4791 в 1990г до 11375 человек в 1995 г. За последние два ода (1998-1999 гг) наибольшее количество случаев бешенства зарегистрировано в 'угарчпнеком (71), Бижбулякском (38), Кумертауском (38), Абзелиловском (26), Ба-алинском (18), Кармаскалинском (17) и др.

Как известно, истребительные меры в сочетании с профилактической иммуни-зцией с.-х. и домашних животных приводят к временному и локальному успеху.

За последние годы показана перспективность оральной иммунизации диких сивотных, как эффективного метода борьбы с природным бешенством, отвечающего нтересам охраны природы (В.А. Седов, 1990; В.А. Седов, П.Ф. Коромыслов, A.B. Пуликовский, 1991; О. Г. Новиков и др., 1996; М.А. Селимов, 1998 и др.).

При возникновении бешенства борьба с ним должна быть организована таким бразом, чтобы обеспечить воздействие на все звенья эпизоотической цепи. Для ус-ешного проведения противоэпизоотических мероприятий важное значение имеет очная и своевременная диагностика. Необходимо отметить, что в РТ и РБ отсутству-т серологический контроль эффективности вакцинопрофилактики бешенства живот-ых.

Нами проведен анализ методов лабораторной диагностики бешенства, нриме-яемых на базе вирусологического отдела Республиканской ветеринарной лаборато-ии Татарстана за период 1994-1998 гг. За указанный период исследовано 1220 проб атологического материала различных видов животных, положительный диагноз по-тавлен в 309 случаях. Первоначально исследования проводили по МФА и РП, в слу-ае получения отрицательных результатов по этим тестам ставили биопробу. За пери-д 1994-1998 гг из 1220 исследованных проб патологического материала от различ-ых видов животных положительный диагноз поставлен по МФА в 222-, по РП - в 54 и по биопробе - в 86 случаях. В 1998 г результатами РП положительный диагноз по-тавлен в 41 случае из 91 положительной пробы, установленном но МФА и биопробе, то составило 45%, то есть недовыявленными оказалось 55% проб. Это указывает на изкую чувствительность РП. Кроме того, РП так же, как и выявление телец Бабеша-1егри нередко дает ложноположительные результаты. На это указывает и официаль-¡о утвержденный ГОСТ 26075-84. МФА, безусловно, является ускоренным и наибо-ее точным из существующих методов микроскопической диагностики бешенства, [увствителыюсть его во многом определяется качеством флуоресцирующего антира-

бического глобулина. Вместе с тем, этот метод имеет и ряд ограничений. Биопроба -наиболее надежна, но она трудоёмка и требует продолжительного наблюдения за подопытными животными (до 30 суток согласно ГОСТу).

В связи с вышеизложенным, возрастает необходимость усовершенствования существующих и разработки новых высокочувствительных и ускоренных методов, а также средств диагностики бешенства.

Результаты проведенных исследований по изучению и оценке эпизооголого-эпидсмиологической ситуации гю бешенству в РТ и РБ за последние годы и мер борьбы с этой болезнью, а также анализ данных литературы свидетельствует о том, что пути усовершенствования противоэпизоотических мероприятий на современном этапе должны предусматривать задачи в следующем направлении:

- Для разработки прогноза ситуации по бешенству и принятия оперативных мер целесообразно систематически проводить картографирование неблагополучных пунктов;

- С целью создания устойчивой защиты к вирусу бешенства у сельскохозяйственных и домашних животных в стационарно неблагополучных районах рекомендуем проводить вакцинацию всего поголовья в течение 2-3-х лет с учетом сезонности проявления заболевания;

- В природных очагах рабической инфекции внедрять оральную иммунизацию лисиц в сочетании с регулированием их численности;

- Изучать биологические свойства изолятов вируса бешенства, циркулирующих в эпизоотических очагах, на антигенное соответствие применяемым вакцинным штаммам;

- Разработать и внедрить эффективные средства и высокочувствительные экспресс-методы лабораторной диагностики бешенства и серологического контроля при антирабической вакцинации;

- Усилить контроль Министерством жилищно-коммунального хозяйства, ГУВ КМ и МВД РТ и РБ за соблюдением установленных правил содержания собак и кошек в городах и населенных пунктах, по учёту, регистрации и ежегодной их иммунизации, улучшить работу подведомственных организаций но отлову безнадзорных животных;

- С целыо повышения ответственности владельцев собак узаконить и практиковать наложение штрафов на виновных лиц за нарушение соблюдения правил содержания и выгула собак в общественных местах (намордник, гюводок и т.д.), за несвоевременную вакцинацию животных и нанесение укусов людям, повлекших за собой физический и моральный ущерб в соответствии с действующим ветеринарным законодательством;

- Систематически проводить широкое оповещение населения о мерах профилактики заболевания гидрофобией людей, издавать популярную литературу, плакаты.

Для выполнения программ профилактики бешенства необходимо сотрудничество специалистов разного профиля: ветеринаров, охотников, медиков, зоологов, представителей коммунальной службы.

Для полной ликвидации городского и природного бешенства необходима комплексная работа всех министерств, ведомств, учреждений и организаций, ответственных за благополучие по данной инфекции, регулярное проведение семинаров но вопросам эпизоотической и эпидемиологической обстановки, отчетность и обмен опытом с привлечением ветеринарных и медицинских врачей из наиболее неблагополуч-

[ых по бешенству районов, более жесткий контроль за выполнением Комплексных шанов мероприятий по профилактике бешенства в Республиках Татарстан й Башкор-остан на 1996-2000 гг.

Прогноз эпизоотической ситуации по бешенству. В системе борьбы с бешенством важное значение имеег эпизоотологическое прогнозирование. 1рогнозирование энзоотии бешенства животных представляет значительные рудности, так как оно прежде всего связано с анализом эпизоотического процесса, [роисходящего в дикой фауне. Известно множество моделей для прогнозирования ¡анного заболевания как зарубежных, гак и отечественных авторов (В.Л. Адамович, 978; Р.А. Канторович, 1978; В.П. Савицкий, 1981; В.Л. Ведерников, 1981, 1991; О.М. )аУ1<1 й а1, 1982; \V.\V. Р^огесИ, 1994 и др.), среди которых определенный интерес редставляет трехфакторный дисперсионный анализ (И.И. Сидоров и др., 1989, 990,1995,1998; А.Д. Ботвинкин, 1990 и др.). Заслуживают внимания также работы 1.Л. Чижевского (1930,1968,1973) и его последователей, установивших влияние олнечной активности на динамику ряда эпидемий и пандемий (холеры, чумы, озвратного тифа, цереброспинального менингата, дифтерии, гриппа, малярии, олиомиелита и др.). При этом в различных климатогеографических условиях икличность эпидемий характеризуется различным отношением к фазе олнцедеятельности. Так, в работах В.П. Савицкого, А.Д. Ботвинкина (1980) по осточной Сибири отмечена связь между спадами пиков солнечной активности и аболеваемостью людей гидрофобией, в то же время В.Л. Адамович (1984) по [ентральной части Русской равнины установил совпадение пиков активности ешенства с циклами высокой солнечной активности.

Динамика эпизоотического процесса, как известно, является интегральным вы-ажением влияния множества причин и условий социального, природного и биологи-еского характера и для каждой конкретной территории она имеет свои особенности.

С целью эпизоотологического прогнозирования ситуации по бешенству в РТ омимо анализа многолетнего уровня заболеваемости бешенством животных нами зучена динамика солнечной активности, численности лисиц, а также мышевидных эызунов - основы кормовой базы лисиц за период 1970-1999 гг.

Прогностические факторы, собранные за исследуемый период, располагали в оследовательные ряды по календарным годам. Абсолютные значения каждого ряда ереводили в проценты от средней многолетней, приняв последние за 100%. Для ка-дого из факторов строили графики погодовой динамики и сопоставляли между со-эй. Графический анализ заболеваемости животных бешенством в республике в со-эставлении с ходом чисел Вольфа показал статистически достоверную обратную 5язь (г = -0,45, Р<0,01). Так, минимальная и предминимальная солнечная деятель-эсть в 1973,1976,1986,1996 гт соответствовали пикам заболеваемости бешенства у ивотных, и наоборот, повышение солнечной активность и её "максимум" совпали со гадом заболеваемости и благополучием по бешенству в 1971,1974,1979,1980, )84,1987, и 1991 гг. Вместе с тем, отмечены три точки заболеваемости на подъёмах и 1на (в 1989 г) - совпала с пиком кривой солнцедеятелыюсти. Нами установлена апатичная закономерность, т.е. достоверная обратная связь влияния солнечной актив-эсги на эпизоотический процесс в РБ (г = -0,35, Р<0,01). Полученная зависимость эзволяет говорить о наличии нерегулируемого природного фактора, воздействующе-> на движущие силы эпизоотического процесса при бешенстве, что имеет большое (ачение для разработки долгосрочного прогноза данного заболевания в исследуемых

регионах. Следующий пик солнечной активности ожидается в 2000 г, и как следстви - спад до минимума заболеваемости животных бешенством. Есть основания ожидат: на территориях Татарстана и Башкортостана вслед за улучшением обстановки по бе шенству в 2000 г. ухудшения эпизоотической ситуации в течение 2001-2003 гг.

Анализ графических данных прогностических факторов выявил тенденции прямой зависимости заболеваемости бешенством животных от численности лисиц 1 обратной зависимости этого показателя от численности мелких млекопитающих. Пр] этом установлена периодичность в колебаниях вышеуказанных параметров. Так, ; динамике численности грызунов выявлены трех-четырехлегние циклы, которые име ли место, если учитывать пики, в 1971-1974 гг, 1974-1977 гг, 1977-1980 гг, 1980-198: гг, 1985-1997 гг, 1997-1991 гг, 1991-1993 гг, 1993-1997 гг. Анализ полученных нам) данных показал, что подъём численности грызунов после депрессии влечет за собо! рост численности лисицы (г=0,2; Р<0,001). В то же время подъём численности лиси1 сопровождается ростом заболеваемости животных бешенством (г = 0,4; Р<0,01). Оп ределена также прямая взаимосвязь численности мышевидных 1рызунов с обще] урожайностью зерновых (г = 0,2; Р<0,001) и обратная - между солнечной активно стыо и общей урожайностью зерновых (г=-0,33; Р<0,01)

Установленные тенденции развития эпизоотии бешенства в РТ использовали 1 прогнозировании ситуации на 1999 год. Так, резкое повышение количества случае) бешенства (до 100 случаев) в 1998 г, сопровождающееся увеличением численносп лисиц при резком сокращении численности 1рызунов позволило сделать неблагоири ятный прогноз на 1999 год. Учитывая это, в республике было запланировано продле ние сроков охоты на лисиц и интенсификация их отстрела в сочетании с орально! иммунизацией, а также проведение всего комплекса противоэпизоотических меро приятии.

3.2. Разработка и усовершенствование средств и методов диагностики бе шенства и лихорадки Ку на основе поликлональных антител. Принимая во вни мание важность своевременной и точной диагностики бешенства и лихорадки Ку, на ми проведены разноплановые иммунологические и биотехнологические исследованш по разработке средств и методов выделения и идентификации вируса бешенства I риккетсий Бернста в патологическом материале и выявления специфических антито в сыворотке крови вакцинированных животных.

Изыскание оптимальных схем гипериммунизации для получения высоко активных антител к возбудителям бешенства и лихорадки Ку. Как известно, чув ствителыюсть серологических реакций во многом зависит от активности и специфичности диагностических сывороток. Исследования показали, что активная специфиче екая сыворотка к вирусу бешенства от овец, кроликов, крыс, морских свинок и ИАЙ белых крыс и белых мышей может быть получена за 1 мес. При этом сыворотки с высокими титрами комплементсвязывающих антител (1:160... 1:1280) получены пр! иммунизации овец, активность которых сохранялась до 10 мес. Исходя из этого, I дальнейших экспериментах в качестве доноров использовали овец, что является наиболее технологичным. При этом, в качестве адъювапта при иммунизации овец наилучшим оказался масляный адъювант, в состав которого входит кремнеорганическа) жидкость - нолиэтилсилоксан (ПЭС-3). Использование ПЭС-3, вместо ранее предло женного К.Ф. Бусыгиным (1983) неполного адыованта Фрсйнда, повышало компле ментсвязывающую активность сывороток крови овец в 2-4 раза.

Сравнительная оценка активности сывороток, полученных в результате имму

шзации антигеном коксиелл Бернета различных видов животных (кролики, морские ;винки и овцы), показала, что наиболее универсальным продуцентом риккетсиозных :ывороток являются кролики. При этом титр комплементсвязывагощих антител был максимальным и составлял 1:320.

Разработка и усовершенствование технологии получения конъюгатов для (нагностикн бешенства и лихорадки Ку методом флуоресцирующих антител. У1ФА является одним из наиболее точных и ускоренных методов микроскопической даагностики многих инфекционных болезней и используется при бешенстве согласно Т>СТу.

Для получения риккетсиозных сывороток, лишенных противотканевых антител, в качестве иммунизирующего антигена применяли 10%-ные взвеси инфициро-¡анных риккетсиями тестикул кроликов. При этом большей активностью, обуславли-¡ающей соответственно и более высокие красящие свойства конъюгатов, обладали :ыворотки животных, для иммунизации которых применяли живые вирулентные птаммы риккетсий "Грита" и "Барабинский", что согласуется с данными других авто-юв (Р.Б. Гольдин, 1969 и др.)

В результате исследований установлена прямая корреляция между комплемен-связывающей активностью иммунной сыворотки, использованной в качестве исход-юго сырья, и красящим титром флуоресцирующих антирабических и антириккетси-льных глобулинов. Для выделения иммуноглобулинов брали сыворотку с титром юмплемснтсвязывавших антител не ниже 1:180. Антирабический флуоресцирующий лобулин выявлял антиген вируса бешенства в виде ярких, желтовато-зеленых гранул »азличной формы и величины от едва заметных, до имеющих 15-20 мкм в диаметре. $ мазках, приготовленных от интактных животных, а также зараженных вирусом боязни Аусски подобных светящихся гранул не отмечено, что свидетельствует о спс-щфичпости конъюгата. Расчеты показали, что порог чувствительности МФА состав-мет 3,8^Ь05о, что соответствует ветеринарно-техническим требованиям, предьяв-[яемым к диагностическим препаратам.

При исследовании 301 пробы патологического материала, полученного от ди-:их, сельскохозяйственных и домашних животных, положительный диагноз по МФА становлен в 194 случаях из 199 положительных по биопробе, что составило 97,4%. В о же время при исследовании 1050 проб от экспериментально зараженных животных овец, кроликов, белых мышей) положительный результат по МФА получен в 100% лучаев; при этом антиген вируса бешенства в головном мозге белых мышей, зараженных фиксированным вирусом бешенства, выявлялся уже на 3-ий день после заражения, то есть за сутки до появления клинических признаков болезни.

Сравнение эффективности МФА с РДСК и биопробой на белых мышах выяви-о ряд несомненных его преимуществ. Прежде всего, это возможность получения от-ета в более короткие сроки - для постановки РДСК требуются одни сут, МФА - 6-14 (согласно ГОСТу), а биопробы - до 30 сут (согласно ГОСТу). Кроме того, в РДСК нтиген вируса бешенства выявляется лишь в мозге экспериментально ззраженных ■елых мышей.

Активные и специфичные флуоресцирующие антирабические глобулины в иофилизированном состоянии сохраняли свою активность в течение 24 мес при хранили их при +4°С (Акт утвержден директором ВНИВИ 10.10.99 г).

Результаты исследований позволили разработать технологию изготовления, онтроля и применения флуоресцирующего антирабического глобулина, а также

нормативно-технические документы (утверждены ДВ МСХиП РФ 21.01.2000 г; полу чено регистрационное удостоверение ДВ МСХиП РФ № Р066-1-4.9-0587 (№ ПВР-1 4.9/00196 от 6.06.2000 г.).

Флуоресцирующий антириккетсиальный глобулин выявлял антиген риккетсш Бериета в виде ярких зелено-желтых гранул, расположенных преимущественно п< периферии клеток в виде светящихся кокковидных образований или их скоплений При этом в отрицательных и тетерологичных контролях зелено-желтого свечения н наблюдалось, что свидетельствует о специфичности конъюгатов. Достоверность по лученных результатов подтверждена на аналогичных ирепаратах-отпечатках, окра шенных но Здродовскому П.Ф. (1965).

Установлена возможность применения флуоресцирующих антириккетсиальны: глобулинов для выявления антигена возбудителя лихорадки Ку в патологическом ма териале от белых мышей, морских свинок и овец, зараженных эпизоотическим и вак цинными штаммами возбудителя лихорадки Ку.

Показано, что антиген коксиелл Бериета обнаруживается у овец через 7 дне! после заражения в мазках - отпечатках из лимфатических узлов (глубоконаховые брыжеечные, средостенные, нижнсчелюстные), селезенки и печени. На 14-й день ис следования антиген выявлялся в надпочечниках и повысилась интенсивность свече ния препаратов из печени. При исследовании с помощью МФА проб органов морски: свинок (15 гол) положительные результаты получены в 100% случаев. При этом Ку риккетсиальный антиген выявлялся с 3-го дня во всех исследованных лимфоузлах I селезенке. В лимфоузлах специфическое свечение антигена в основном отмечалось ] синусных макрофагах, а в селезенке - клетках системы мононуклеарных фагоцито! красной пульпы. С 5-го дня положительную иммунофлуоресценцию наблюдали в пе чени и легких, где антиген выявлялся в макрофагальных элементах перечисленный органов. Количество и интенсивность флуоресцирующих клеток с развитием инфек ционного процесса в органах нарастали и были максимальными на 30-40-е сут. В маз ках-отпечатках из селезенок белых мышей положительные результаты получены в 9< случаях (штамм "Барабинский") и в 97 случаях из 100 (штамм "Грита").

Таким образом, полученные результаты показывают, что разработанный нам! флуоресцирующий антириккетсиальный глобулин обеспечивает выявление антиген; возбудителя лихорадки Ку в патологическом материале зараженных животных ш МФА независимо от штаммовой характеристики и рекомендуется для диагностик! данного заболевания.

Активность изготовленных и лиофилизированных флуоресцирующих антирик-кетсиальных глобулинов не снижалась в течение 18 мес при хранении их при +4°С (срок наблюдения). Результаты исследований вошли в разработанные нами Методические указания по лабораторной диагностике лихорадки Ку животных № В-6-2/600 утвержденные ДВ МСХиП РФ 13.05.96 г.

Разработка и усовершенствование технологии получения иммуноглобулинов, конъюгатов и антигенов для диагностики бешенства и лихорадки Ку методом ИФА. Прежде всего были отработаны оптимальные условия эффективного использования ИФА для быстрой диагностики бешенства и лихорадки Ку, а также титрования специфических антител. Результаты исследований показали, что эффективность ИФА в значительной степени зависит от качества конъюгата. Для приготовления антирабнческих и антириккетсиалынлх иммуноферментных конъюгатов былс проведено 240 серий опытов с использованием с различным титром специфически?

антител.

Показано, что активность конъюгата обусловлена, в первую очередь, таковой специфического используемого для конъюгации с пероксидазой. Установлено, что активность 1", выраженная в титрах комплементсвязывающих антител, должна составлять не менее 1:320. Качество конъюгата зависело также от степени чистоты Гд, используемых для конъюгации с пероксидазой. При испытании антирабических и ан-тириккетсиальных выделенных ионнообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе или гель-фильтрацией на сефадексе С-200, и глобулинов, полученных осаждением сульфатом аммония или ПЭГ 6000, выявлено преимущество первого способа - обеспечение максимальной активности конъюгата (1:1600, Ксп=17,8±0,2 и 1:1000, КОП=Т2,8±0,1 соответственно) и в связи с этим высокой чувствительности метода ИФА. Значительную активность (1:800 и 1:500) проявляли конъюгаты из 1ц, полученных из сывороток методом гель-фильтрации на сэфадексе 0-200 (Ксп=17,8+0,1 и Ксп=13,3±0,2 соответственно) и осаждением насыщенным раствором сульфата аммония (Ксп=9,76+0,15 и КС11=7,6±0,1). Качество конъюгата, кроме того, зависело от оптимального соотношения пероксидазы и иммуноглобулина (коэффициент связывания). Показано, что коэффициент связывания должен быть от 0,45 до 0,6.

Большое внимание уделяли изучению специфичности конъгогатов. Реакцию ставили с использованием разнообразных контролей (положительный, отрицательный, гетерологичный антигены и отрицательный Положительный антиген в контроле с о трицательным ^ давал низкую оптическую плотность, гетерологичный и отрицательный антигены также не реагировали со специфическим ^ и конъюгатом, что свидетельствует о специфичности конъюгата.

При изучении влияния способа и срока хранения на стабильность конъюгатов было установлено, что они не теряют своей активности в жидком и высушенном состоянии минимум в течение 2-х лет (срок наблюдения) при +4°С.

Целью дальнейших исследований являлась разработка способа получения неинфекционного антигена рабического вируса, исключающего риск заражения бешенством лабораторных работников, обладающего высокой специфической активностью в серологических реакциях: ИФА, РДСК и др. В этих целях использовали 10%-ную суспензию мозга мышей, зараженных штаммом "Овечий" ГНКИ или культуральные вируссодержащие жидкости с титром инфекционности не ниже 5,731 ГО50/ 0,01 мл. В качестве испытуемого инактиватора применяли акролеин в различных концентрациях и режимах инкубации с вирусом. Прототипом служил фенол, аналогом - термическое воздействие.

В результате исследований установлена оптимальная концентрация акролеина, надежно инактивируюшая вирус бешенства при 22°С в течение 1 ч, составляющая 0,5%, а при 37° С в течение 30 мин. - 1 %. Указанный способ даёт возможность получать антиген с высоким титром в ИФА - 1:3200, в отличие от прототипа и аналога -1: 800. При этом титр вируса бешенства в ИФА до воздействия инактиваторов составлял - 1:3200. Инактивация акролеином антигена вируса бешенства позволяет использовать его в РДСК, так как после инактивации антиген не обладает антикомплементарными свойствами.

При интрацеребральном введении белым мышам определена безвредность и отсутствие токсичности препарата. Таким образом, разработан простой и технологичный способ приготовления инакгивированного акролеином антигена вируса бешенства для использования его в серологических реакциях, который защищен па-

тентом РФ № 1824196 от 5.03.94г.

В качестве стабилизаторов при хранении антигенов в лиофилизированном состоянии применяли 2% инактивированной лошадиной сыворотки с 5% сахарозы. При этом контрольный положительный антиген не утрачивал своей активности в лиофилизированном состоянии в течение 2-х лет (срок наблюдения), а контрольный отрицательный антиген не давал фона в ИФА.

Исследования по разработке ИФА позволили выявить оптимальные условия по применению отечественных реактивов и планшетов. Из трех взятых в опыт хромогенов (ОФД, 5'-АС, З-З'-ДБХ) наиболее чувствительным к пероксидазе оказался ОФД. Испытанием отечественных детергентов (препарат ОС-20, стеарокс 920, сорбиталь С 20) в сравнении с зарубежными (твин 20, твин 80, тритон Х-100) в ИФА показана возможность применения их на всех этапах реакции и замены ими зарубежных аналогов. Из отечественных детергентов наилучшим оказался сорбиталь С 20.

Установлена целесообразность использования пероксидазы из корней хрена производства НПО "Биолар" (г.Олайне, Республика Латвия), Я2. = 2,9-3,0, а также планшетов для иммунологических реакций производства ВНИИ медицинской техники (г.Москва).

Проведена экспериментальная работа по стандартизации условий проведения различных вариантов ИФА для диагностики бешенства , лихорадки Ку и титрования специфических к ним сывороток. Подобраны оптимальные концентрации реагентов (антигена, антител, конъюгата), определены основные условия для постановки реакции (рН комплексирующего буфера, оптимальная температура и продолжительность инкубации), обеспечивающие достижение необходимой точности и чувствительности метода. Так, максимальная чувствительность прямого сэндвич-варианта ИФА для определения антигена вируса бешенства и риккетсий Бернета достигается при соблюдении следующих условий: сенсибилизации планшета специфическим иммуноглобулином в течение 18 ч при +4°С в концентрации по белку 5 мкг/мл, при оптимуме рН 0,01М карбонатно-бикарбонатного буфера (КББ) 9,6 и инкубации исследуемого антигена и конъюгата в течение 1 ч при +37°С.

Изучение стабильности 1%, иммобилизованного на планшете, показало, что ^ сохраняет свою активность в течение 6 мес (срок наблюдения) при +4°С. Применение заранее сенсибилизированного ^ планшета сокращало время получения ответа до 34 ч без потери чувствительности метода.

Исследованиями установлено, что максимальная чувствительность непрямого сэндвич-варианта ИФА для выявления антигена вируса бешенства достигается при одночасовой инкубации исследуемого антигена с иммобилизованным на планшете двухчасовой инкубации антигена с антисывороткой и одночасовой - конъюгата с антисывороткой при +37°С.

При разработке непрямого варианта ИФА для титрования сывороток специфическим антигеном для сенсибилизации планшета служили культуральный вирус бешенства из штамма "Овечий" ГНКИ, выращенный в культуре клеток ВНК-21, инак-тивированный, очищенный и концентрированный ацетатом цинка по 8око1 Р.(1975), а также риккетсиальный антиген из штамма "Барабинский" (1 фазы), очищенный и концентрированный дифференциальным центрифугированием, обработанный 0,1 МУл НС1.

В непрямом варианте ИФА, используемого для титрования сывороток, максимальное связывание антигенов вируса бешенства и коксиелл Бернета с полистиролом

происходит при разведении их на 0,01М КББ с рН 9,6 при +4°С в течение 3 ч и 18 ч соответственно и концентрации рабичеекого антигена - 25 мкг/мл и риккетсиально-го - 60 мкг/мл.

Итогом исследований по разработке оптимальных условий проведения ИФА явились разработанные нами Наборы препаратов для лабораторной диагностики бешенства и лихорадки Ку животных методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Испытание и сравнительная эффективность метода ИФА для обнаружения антигенов вируса бешенства, коксислл Бернета и антител к ним.

В соответствии с приказом Главного управления ветеринарии МСХ СССР (29.03.85 г.) были проведены с положительной оценкой межведомственные комиссионные испытания активности и специфичности "Набора препаратов для лабораторной диагностики бешенства животных методом иммуноферментного анализа (ИФА)". Всего с использованием этого набора исследовано 63 пробы патологического материала, хранившегося в глицерине при -20ПС, в том числе 41 - от больных бешенством диких животных и 18 - от людей, умерших от гидрофобии ( коллекция лаборатории профилактики бешенства и природной очаговости вирусных зоонозов ИПВЭ РАМН, г.Москва), а также 239 проб мозга различных видов диких, с.-х. и домашних животных, поступивших в различные годы из республиканской ветеринарной лаборатории ГУВ КМ РТ (г.Казань) и БашНПВЛ (г.Уфа).

Анализ их показывает, что метод ИФА позволяет выявлять антиген вируса бешенства во всех пробах, хранившихся в глицерине при -20°С, в которых ранее было установлено бешенство биопробой и МФА. Как известно, материал, консервированный глицерином, для исследования МФА не пригоден. В результате исследований показано, чгго из 199 проб, положительных по биопробе, положительный диагноз поставлен методом ИФА в 196 случаях, что составило 98,4%, по МФА - в 194 случаях (97,4%). В трех случаях нам не удалось обнаружить методом ИФА антиген рабичеекого вируса, так как концентрация вируса была очень низкой и составила:0,7!ц Ь050/0,03 мл; 0,9 ^ [Л350/0,03 мл; 1,1 ^ ГГ)5г>/0,03 мл. МФА не подтвердил положительные результаты по биопробе в 5 случаях. Расчеты показали, что порог чувствительности метода ИФА составляет 3,3 ^ Ь05о/'.мл, МФА - 3,8 Г^о/мл. При этом результатами световой микроскопии тельца Бабеша Негри выявлены лишь в 37 пробах, что составило 24,5%, т.е. недовыявленными оказалось 75,5% проб. Это указывает на низкую чувствительность световой микроскопии. При исследовании 380 проб головного мозга различных животных установлена высокая корреляция результатов МФА и ИФА. Коэффициент соответствия составил 98,9%. Незначительное расхождение результатов этих тестов связано с более высокой чувствительностью ИФА по сравнению с МФА, а также избирательной локализацией вируса в отделах головного мозга. В то же время при исследовании 3140 проб головного мозга животных, павших после первичного заражения, или последующих пассажей, расхождений результатов ИФА и МФА не отмечено.

При изучении динамики появления антигена вируса бешенства в головном мозге белых мышей, зараженных фиксированным вирусом бешенства, штамм "Овечий" ГНКИ, установлена возможность достоверного обнаружения его методом ИФА уже на 2-ой день после заражения, то есть за 2 сут до появления клинических признаков болезни.

Таким образом, в результате исследований показано, что метод ИФА может быть использован для обнаружения антигена вируса бешенства в головном мозге жи-

вотных, как самостоятельный экспресс-метод диагностики, так и в сочетании с МФА и биопробой. Одновременное применение двух экспресс-методов - ИФА и МФА, обеспечивает более надежный диагноз, особенно при сомнительном результате одного из них. При этом визуальный учет ИФА не требует специальной аппаратуры, что позволяет использовать его в полевых условиях и лабораториях, не оснащенных люминесцентными микроскопами. На заранее сенсибилизированных иммуноглобулином планшетах результат ИФА может быть получен в течение 5-6 ч.

В результате исследований разработаны технология изготовления, контроля и применения "Набора препаратов для лабораторной диагностики бешенства животных методом иммуноферментного анализа (ИФА)", а также нормативно-технические документы (утверждены ДВ МСХиП РФ 11.12.98 г.).

Разработанная нами иммуноферментная гест-система с применением инакти-вированного культуралыюго антигена из штамма "Овечий" ГНКИ вируса бешенства обеспечивает выявление специфических антител в сыворотках крови животных и людей, иммунизированных против бешенства и оценку контроля эффективности вакци-нопрофилактики. Сравнительное исследование 1248 проб сывороток крови от различных видов животных, вакцинированных против бешенства, а также 18 проб сывороток крови людей, вакцинированных культуральной антирабической вакциной из штамма "Внуково-32", в непрямом ИФА , РДСК и РН на мышах выявило прямую корреляцию результатов титрования сывороток крови методом ИФА и РДСК (г=0,3; Р<0,05), а также высокую чувствительность ИФА. При этом чувствительность ИФА превосходила таковую РДСК в 100-200 раз, по времени постановки ИФА также превосходит РДСК и РН на белых мышах. Разработанный непрямой вариант ИФА представляет эффективный лабораторный тест для титрования антирабических сывороток крови животных и людей, иммунизированных против бешенства.

Результаты исследований вошли в разработанные нами Наставление по применению "Набора препаратов для выявления антирабических антител методом иммуноферментного анализа (ИФА)", которое утверждено директором ВНИВИ 26.02.97 г.

Нами разработан также "Набор компонентов для выявления антител к возбудителю лихорадки Ку методом ИФА", а также Временное наставление по его применению, утвержденное директором ВНИВИ 27.09.95 г., предназначенный для обнаружения специфических антител в сыворотке крови больных и экспериментально зараженных животных и ускоряющий время постановки диагноза по сравнению с биопробой в 30 раз. При этом чувствительность ИФА в 80...800 раз превышает таковую РДСК.

Для выявления возбудителя лихорадки Ку в патматериале нами разработан "Набор компонентов для выявления антигена возбудителя лихорадки Ку в патматериале методом ИФА", а также Временное наставление по его применению, утвержденное директором ВНИВИ 27.09.95 г. Иммуноферментный набор рассчитан на исследование 30 проб и позволяет обнаруживать специфический антиген в течение 5-6 ч, что ускоряет время постановки диагноза но сравнению с биопробой в 30 раз. Установлено, что сэндвич-вариант ИФА позволяет обнаруживать антиген возбудителя лихорадки Ку в паренхиматозных органах экспериментально зараженных белых мышей, морских свинок и овец независимо от штаммовой принадлежности. Так, показано достоверное обнаружение антигена возбудителя лихорадки Ку методом ИФА, начиная с 3-их сут после заражения в селезенке в титре 1:20 (Ксп>2,1), а через 10 сут - в селезенке, печени, легких и лимфоузлах в титрах 1:40, 1:10, 1:40 и 1:20 соответствен-

но. Максимальные тиары антигена в органах больных морских свинок достигали на 40-ые сут после заражения и составили в селезенке - 1:640, в легких и печени - 1:160, а у овец - 1:160, 1:80 и 1:160 соответственно. Специфичность результатов подтверждена световой микроскопией и биопробой на белых мышах. Данные разработки вошли в "Методические указания по лабораторной диагностике лихорадки Ку животных" № В-6-2/600, утвержденные ДВ МСХиП РФ 13.06.96 г.

Усовершенствование метода ИФЛ и МФА. С целью усовершенствования МФА и ИФА наряду с флуорохромом зеленого свечения (ФИТЦ) и ферментом нерок-сидазой из корней хрена нами установлена возможность и некоторые преимущества применения для изготовления аитирабических конъюгатов флуорохрома красного гвечения - ФАР-4 и фермента - пирофосфатазы из Е.соП. Чувствительность пиро-фосфатазного иммуноанализа составила 3,5 ^ ГО50, МФА с применением антираби-теского глобулина, меченного ФАР-4 - 3,9 Ш50, что соответствует ветеринарно-гехническим требованиям, предъявляемым к диагностическим препаратам. Усовер-денствованные экспресс-методы диагностики бешенства на основе пирофосфатазы (з Е.соП и ФАР-4 расширяют арсенал диагностических средств и методов исследования. На указанные диагностические средства разработаны соответствующие НТД,. утвержденные ДВ МСХиП РФ.

Производство наборов препаратов для лабораторной диагностики бешен-;тва и лихорадки Ку методом ИФА и МФА и их практическое применение. В на-;тоящее время во ВНИВИ (г.Казань) в полном объеме налажено производство препа-затов, предназначенных для обнаружения антигена вируса бешенства в патологиче-жом материале иммуноферментным и иммунофлуоресцептпым методами1 в соответ-;твии разработанным в институте НТД. По заявкам ветеринарной и медицинской :лужб Российской Федерации и стран СНГ ежегодно изготавливаются и высылаются тборы флуоресцирующего антирабического глобулина (ФАГ) и наборы препаратов ;ля лабораторной диагностики бешенства методом ИФА.

Всего за период 1985-1999 гг и 6 мес 2000 г было реализовано по заявкам Гос-¡етслужбы СССР и РФ 945 диагностических наборов (483260 доз). Рекламаций на 'казаниые диагностические наборы не поступало.

Для проведения лабораторных исследований на лихорадку Ку во ВНИВИ еже-одно нарабатываются разработанные нами диагностические средства, обеспечиваю-цие достоверное обнаружение и идентификацию возбудителя этой болезни в патоло-ическом материале от грызунов, с.-х. животных и клещей, собранных в природном ■чаге, методами ИФА, иммунофлуоресценции и постановкой биологической пробы, а акже выявление специфических антител в сыворотках крови с.-х. животных и грызу-юв в РДСК и ИФА с использованием антигена возбудителя лихорадки Ку,. 1 фазы.

При поступлении материала с подозрением на лихорадку Ку исследования [роводили комплексно, согласно разработанным нами "Методическим указаниям но абораторной диагностике лихорадки Ку", утв. ДВ МСХиП РФ 13.05.96 г. Так, при сследовании 423 проб сывороток крови овец, принадлежащих двум племенным хо-яйствам Саратовской области, методами ИФА и РДСК получены отрицательные ре-ультаты. В связи с этим, дана рекомендация о возможности экспортировать живот-ых из этих хозяйств, как благополучных по лихорадке Ку. С целью установления тиологии кератоконъюнктивита исследовали сыворотки крови заболевших телят (6 роб), а также сыворотки крови с.-х. животных (56 проб), абортированный плод, робы молока и спермы, а также паренхиматозные органы вынужденно убитого те-

ленка, принадлежащих ТОО Агрофирмы "ПАХМА" Ярославского района Ярославской области.

В результате комплексных исследований в сыворотках крови животных в РДСК и ИФА выявлены специфические антитела к коксиеллам Бернета в титрах 1:10 - 1:80 и 1:100 - 1:1600 (Ксп >2,1) соответственно. Микроскопическими исследованиями (световая и люминесцентная), а также методом ИФА в селезенке и легких абортированного плода и глазной жидкости вынужденно убитого теленка обнаружены риккетсии Бернета.

При постановке биопробы в сыворотке крови белых мышей, зараженных суспензией из патматсриала больных телят, в РДСК и ИФА выявлены специфические антитела, а в селезенках этих мышей - специфический антиген коксиелл Бернета. Таким образом, проведенными комплексными исследованиями с применением диагностических наборов препаратов, разработанных во ВНИВИ, установлена риккетсиоз-ная природа кератоконъюнктивита телят и аборта нетели ТОО Агрофирмы "ПАХМА".

Лихорадка Ку в РТ не регистрируется. Тем не менее, провели контрольные исследования на наличие специфических к коксиеллам Бернета антител 250 проб сывороток крови к.р.с. в отдельных районах РТ. Исследования сывороток методом ИФА и в РДСК показали отрицательные результаты, что свидетельствует об отсутствии циркуляции возбудителя лихорадки Ку в обследованных районах республики.

3.3. Ускоренная диагностика бешенства и лихорадки Ку в культуре клеток. Исследования по изучению чувствительности различных клеточных культур (НГУК-1, ВНК-21, СПЭВ и МДСК) к полевым штаммам рабического вируса (использовано 8 штаммов) показали, что уличный вирус бешенства размножается в культуре клеток НГУК-1, в то время как его репликация не установлена в культуре клеток ВНК-21, МДСК и СПЭВ. В цитоплазме клеток НГУК-1, зараженных вируссодержа-щим материалом, обнаруживали желтовато-зеленые, ярко свегящиеся комплексы, расположенные преимущественно в ее перинуклеарной зоне. С помощью МФА установлена динамика накопления вируса в этой культуре. Так, в 1-ый день инкубации специфически светящиеся включения обнаружены в единичных клетках. На 2-е сут происходило увеличение размеров специфически флуоресцирующих гранул (0,4;0,5 мк), а также количества инфицированных клеток, достигающее 19,5±0,3%. В культуре клеток, инкубированных в течение 3-х сут после заражения, было отмечено возрастание размеров флуоресцирующих гранул до 0,7...2,0 мк и количества инфицированных клеток, составившее 27,5+1,2%. Положительный ответ в этог срок исследований был получен в 100% случаев. В контроле, где клетки 11ГУК-1 были инкубированы с мозговой взвесью от интактных животных, при окрашивании их флуоресцирующим гамма-глобулином специфических гранул не обнаружено. Кроме того, специфичность результатов по МФА подтверждалась интрацеребральным заражением культуральной жидкостью. Таким образом, вирус бешенства выявлялся в клетках НГУК-1 спустя 24...72 ч после заражения. Максимальное накопление его в клетках наблюдается на 3-4-е сут после заражения. В дальнейших экспериментах проводили сравнительную оценку эффективности методов выделения уличного рабического вируса в перевиваемой культуре клеток НГУК-1 с последующим применением МФА и биопробой на белых мышах. При сравнительном исследовании 443 проб патологического материала от животных установлено полное совпадение результатов биопробы на белых мышах и в культуре клеток НГУК-1.

Показано, что в данной культуре клеток уличный рабический вирус может быть выделен в более ранние сроки (24-72 ч), чем при интрацеребральной инокуляции мышей (до 30 сут и более), без проявления цитопатического действия. Метод выделения уличного вируса в культуре клеток НГУК-1 с последующим анализом по МФА рекомендован для внедрения в практику ветеринарных лабораторий.

Методика выделения уличного вируса бешенства из патологического материала в культуре клеток НГУК-1 с последующим применением МФА вошла в разработанные нами совместно с сотрудниками Института полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН им. М.П. Чумакова (проф. М.А. Селимов, к.в.н. А.Г. Татаров, д.б.н. З.Я. Кармышева, д.м.н. Л.И. Кондакова) "Методические указания по лабораторной тиагаостике бешенства животных", утв. ДВ МСХиП РФ 14.05.97 г.

Нами установлена также возможность выделения уличного рабического вируса i микрокультуре клеток НГУК-1 с последующим ИФА, выгодно сочетающей пре-шущество микротитрационной техники с чувствительностью и специфичностью 4ФА. При этом исключается необходимость приготовления пробирок с покровными ¡теклами, значительный расход культуры клеток и питательной среды, нестандарт-гость выращиваемой в пробирках культуры клеток на покровных стеклах и большой >асход флуоресцирующего антирабического глобулина.

В дальнейших исследованиях показано преимущество первичнотрипсинизиро-'.аниой культуры клеток куриных фибробластов по сравнению с биопробой, обеспе-швающая обнаружение антигена возбудителя лихорадки Ку на 2-3-и сут после заражения.

Разработанные экспресс-методы широко внедряются в условиях Республиканкой ветеринарной лаборатории ГУВ КМ РТ и БашНПВЛ г.Уфа.

3.4.Усовершенствован не системы противоэпизоотических мероприятий по ешенству в условиях Республик Татарстан и Башкортостан. Учитывая стацио-арное неблагополучие районов Татарстана и Башкортостана по бешенству, нами со-местно с ГУВ КМ РТ и ГУВ МСХиП РБ внесены предложения в Комплексные пла-ы мероприятий по борьбе с бешенством на 1996-2000 гг, утвержденные Постановле-иями №403 от 22.05.1996 г.ГУВ КМ РТ и № 132 от 10.04.96 г. ГУВ МСХиП РБ.

С целью усиления борьбы с бешенством Главными государственными ветери-арным инспектором и санитарным врачом РТ, при нашем участии принято Поста-овление "О неотложных мерах по борьбе с бешенством в Республике Татарстан", № от 10.02.1999 г.

Идентификация и изучение биологических свойств эпизоотических изолн-эв вируса бешенства. При планировании профилактических мероприятий необхо-имо учитывать как этологию диких животных, так и биологические свойства пгтам-ов возбудителя бешенства, циркулирующих в регионе (К.Н. Груздев, А.К. Груздев, 397; И.А. Бакулов,1998; H.A. Хисматуллина, 1998; С.Р. Янбарисова и соавт., 1998; .3. Равилов и соавт., 1999 др.).

В связи с этим, перед нами ставилась задача по обнаружению рабического ан-lrena в патологическом материале, выделению и изучению антигенных и патоген-ых свойств изолятов вируса бешенства, циркулирующих на территории Татарстана и ашкортостана.

Для идентификации возбудителя бешенства, выделенного нами в РТ и РБ, ис-эльзовали реакцию нейтрализации. В опытах в качестве специфических антител эимеиялн антнрабическии гамма-глобулин, полученный из сыворотки крови овец,

иммунизироваиных вакцинным штаммом "Овечий" ГИКИ вируса бешенства с индексом нейтрализации равным 2 и более. Обнаружение рабического антигена в патологическом материале проводили по МФА и ИФА, а выделение вируса бешенства - в культуре перевиваемых клеток НГУК-1, согласно методических рекомендаций, утвержденных ДВ МСХиП РФ 14.05.97г. Из 339 проб иатматериала положительный диагноз поставлен указанными методами в 315 случаях. Титры специфического антигена уличного вируса бешенства в зависимости от содержания его в патмагериале в ИФА варьировал в пределах от 1:10 до 1:160 при Кш = 2,1 и более. Изучаемые изоля-ты вируса бешенства выделялись в культуре клеток НГУК-1 с последующим обнаружением рабического антигена по МФА и ИФА через 48-72 ч после заражения без проявления цигопатического действия. При экспериментальном заражении эпизоотические изоляты были патогенными для белых мышей, морских свинок, домашних и с.-х. животных.

Изучением степени патогенности проведенным с изолягами вируса бешенства, выделенных от лисиц из Лаишевского (эксп. 4848 и 3168), Апастовского (эксп. 1582), Атнинского (эксп. 4090), собаки из Тюлячинского (эксп. 2155), крупного рогатого скота из Новошешминского (эксп. 3524), Заинского (эксп. 810) и барсука из Верхне-Услонского (эксп. 2461) районов Татарстана установлено различие их по степени патогенности для лабораторных животных - индекс инвазивности колебался от 0,9 до 2,3. При этом инкубационный период уличных изолятов вируса бешенства варьировал в среднем от 12 до 26 сут. Следовательно, в РТ циркулируют как высоко-, так и слабопатогенные штаммы вируса бешенства.

В дальнейших исследованиях вакцинировали котят 3-х месячного возраста ан-тирабической инактивированной культуральной вакциной из штамма "Щелково-51" согласно Наставлению по ее применению. Через 14 сут после 2-го введения вакцины животных подвергали контрольному заражению эпизоотическими изолятами рабического вируса - экс. 4848, 1582, 4090, 2155 и 3524 и наблюдали в течение 45 сут. По истечении срока наблюдения вакцинированные животные оставались здоровыми после заражения, а контрольные (не иммунизированные) - заболевали и погибали. Полученные результаты указывают на антигенное соответствие циркулирующих в Татарстане эпизоотических изолятов вируса бешенства вакцинным штаммам "Овечий" ГНКИ и "Щелково-51", чго имеет определенное значение при проведении противо-эпизоотических мероприятий (диагностика, профилактика).

Результаты исследований 112 проб патологического материала от различных животных из неблагополучных районов РБ с помощью ИФА и МФА указывают на антигенное родство циркулирующих Башкортостане штаммов с вакцинным "Овечий" ГНКИ. При этом вирусспецифический антиген выявлялся в титрах от 1:10 до 1:320 при Ксп = 2,1 и более.

Экспериментальным заражением была установлена патогенность изучаемых штаммов для лабораторных животных - белых мышей, морских свинок и кроликов. Специфичность клинических проявлений бешенства у животных подтверждена методом ИФА и МФА. Показана вариабельность степени патогенности эпизоотических штаммов вируса бешенства. При этом индекс инвазивности варьировал от 1,8 до 3,2. Вместе с тем, необходимо отметить заслуживающий внимания факт наблюдения нами четырех случаев абортивного бешенства, то есть выздоровления белых мышей, переболевших бешенством с явно выраженными клиническими проявлениями, характеризующимися возбуждением с последующими параличами задних конечностей.

Продолжительность клинических проявлений длилась 2-3 дня, с 9-11, 25 дней после заражения.

Следовательно, в РБ циркулируют как высоко-, так и слабопатогенные штаммы вируса бешенства.

Таким образом, на основании изучения иммунобиологических свойств изоля-тов вируса бешенства, циркулирующих на территории Татарстана и Башкортостана, установлена патогенность их для с.-х., домашних и лабораторных животных. Исследованные изоляты выделялись в культуре клеток НГУК-1 без проявления цитопати-¡сского действия и имели ярко выраженные прецшштнрующие и комплеменгфикси-эуюгцие свойства. Установлено также антигенное родство уличного рабического вируса с вакцинным ("Овечий" ГНКИ и "Щслково-51"), что имеет определенное значе-ше при проведении диагностики профилактических мероприятий.

Как известно, на территории России обитает 40 видов рукокрылых и изредка зтмечаются покусы людей этими животными.

Юля, 11 лет, в Белгороде 08.05.85 г была внезапно укушена за нижнюю губу тетучей мышью. Через 20 дней после нападения летучей мыши девочка ночувствова-ia недомогание, боли в щеке, горле, заторможенность, повышение температуры -1ризпаки поражений черепных нервов, зрительные галлюцинации, аэро-, гидро- и ау-софобию, нарушение дыхания и через 6 дней скончалась при явлениях комы. В лабо-ттории профилактики бешенства ИПВЭ РАМН им. М.П. Чумакова (г. Москва) с на-пим участием (М.А. Селимов, А.Г. Татаров, А.Д. Ботвинкин, JI.A. Куликова, H.A. <исматуллина, 1987) проведена идентификация с помощью 36 антинуклеокапсидных vi К А (производства института Вистар, США) вируса Юли, а также других нзолятов, 1ыделенных от людей, умерших от гидрофобии, лисиц, длинохвостого суслика, necia, кошки в непрямом МФА. В качестве контроля использовали вакцинные штаммы ¡ируса бешенства "Внуково-32" (линия штамма SAD) и "Овечий" ГНКИ (линия итамма Pasteur). 9 полевых штаммов (Руз, Кар, Дро, Лиса 1, Лиса 2, Лиса 3, П-305, Dye, Кош) из 10 исследованных, а также вакцинные - "Впуково-32" и ГИКИ отнесены : классическим вирусам, первому серотипу, так как они реагировали аналогично лассическому вирусу, штамму CVS, и не реагировали с клоном 422-5, специфичным щя лиссаподобных вирусов. Штаммы "Внуково-32" и ГНКИ оказались идентичными . антигенном отношении штамму CVS. Вместе с тем, штаммы "Дро" и "П-305" отли-ались от штамма CVS лишь по одному клону - 590-2 и 102-27 соответственно, а тгамм "Сус", выделенный от суслика - но 7 клонам: 111-17, 805-3, 111-2, 389-1, 701102-27,816-1.

Вирус, выделенный от умершей девочки, укушенной летучей мышыо (штамм Эли) значительно отличался в антигенном отношении от классического вируса, ттамма CVS. Он не реагировал с 21 и частично взаимодействовал с 2 ангинуклеокап-иднымп МКА, специфически связывающимися со штаммами рабического вируса -04-4 и 714-3. Исследуемый вирус идентифицирован нами как лиссаподобный, так ак он реагировал частично с клоном 422-5, специфичным для этих вирусов. Вирус Эли, Давенхейдж, Мокола и Лагос имеют общие антигенные профили по 24 клонам, ¡ирус Юли в отличие от Мокола вируса не вступает в реакцию с 6 клонами (222-9, 17-5, 307-5, 239-10, 237-10 и 703-8), от Лагос вируса он отличается тем, что не еагирует с 3-я МКА (222-9, 817-5 и 801-3). С клоном 714-3 африканские иссаподобные вирусы и Давенхейдж вирус не связывается, а вирус Юли связывается астично. Вирус Юли в отличие от других лиссаподобных вирусов положительно еагирует с МКА 515-3.

Можно полагать, что вирус Юли представляет самостоятельный подтип вирусов типа Давенхейдж. Вместе с тем, он не сходен с Давенхейдж вирусом по некоторым биологическим характеристикам. Так, вирус Юли при впутримозговом заражении мышей имеет продолжительный инкубационный период (12-24 дня) (веНтоу й а1., 1986). В течение нескольких серийных пассажей его титр в мозге остается низким, а Давенхейдж вирус напоминает фиксированный вирус: короткий инкубационный период у мышей (6-9 дней), мелкие включения (О.Н. ^пог й а]., 1977).

Таким образом, на основании анализа результатов наших исследований можно заключить, что циркулирующие на территории нашей страны штаммы вируса бешенства по нуклеокапсидной антигенной структуре не идентичны и отнесены к классическому вирусу, первому серотипу. Вирус Юли идентифицирован как лиссаподобный вирус типа Давенхейдж и отнесен к четвертому серотипу. Это первое обнаружение лиссаподобного вируса на территории России. В последующем было обнаружено еще два, выделенных на территории Западной Сибири (М.А. Селимов, 1991). Другой штамм Араван, выделенный от летучей мыши в Кыргызстане, оказался лиссавирусом, с оригинальным антигенным профилем, не имеющим аналогов среди известных серо-типов (И.В. Кузьмин, А.Д. Ботвинкин и соавт., 1992). В связи с этим, указывается на необходимость развертывания исследований по созданшо вакцины и антирабического глобулина против лиссаподобных вирусов (М.А. Селимов, 1987).

Серологический контроль эффективности иммунитета при антирабичс-ской вакцинации животных. Непрямым методом ИФА исследовано 296 проб сывороток крови к.р.с., вакцинированного инактивированной антирабической вакциной из штамма "Щелково-51доставленных из неблагополучных районов Татарстана и 448 проб сывороток крови с.-х. животных, в том числе 413 - к.р.с., 14 - лошадей и 18 проб сывороток крови овец то неблагополучных районов Башкортостана, доставленных для анализа на содержание специфических антител в различные сроки после вакцинации.

В результате исследований установлено высокое содержание специфических антител (титры 1:200 - 1:1600) в сыворотках крови всех видов животных в первые 6 мес после вакцинации. В последующие сроки - на 7,8 и 9 мсс после вакцинации наблюдается снижение уровня антител. В связи с этим, для создания устойчивой иммунологической защиты к вирусу бешенства у с.-х. и домашних животных в стационарно неблагополучных районах Татарстана и Башкортостана нами рекомендуется проводить вакцинацию всего поголовья в течение двух-трех лет.

Профилактика бешенства лисиц на территории Татарстана и Башкортостана. Решение проблемы борьбы с бешенством, как известно, требует не только защитных, но и наступательных действий, направленных на контроль эпизоотического процесса в природных очагах. В этой связи представляется перспективной оральная иммунизация диких плотоядных в комплексе с активными мероприятиями по регуляции их численности.

Согласно Постановлению КМ РТ №403 от 22.05.96 г нами совместно с ГУВ КМ РТ разработан «План организации мероприятий по профилактике бешенства лисиц», определена территория для раскладки вакцин в неблагополучных по бешенству районах республики, утв.ГУ В КМ РГ 25.02.97 г.

С осени 1996 г по настоящее время в РТ внедряется пероральная иммунизация диких плотоядных, главным образом лисиц - главного источника и распространителя болезни. В 1996 г пероральная иммунизация проведена с применением антирабиче-

;кой вирусвакцины ВГНКИ в шести особо неблагополучных районах! республики Лаишевском, Алькеевском, Югазинском, Азнакаевском, Муслюмовском и АКтаныш-ком); в 1997 г - весенняя иммунизация в 12 районах с использованием вакцины Н'НКИ, а в качестве приманок - куриные головы (по 270 доз на каждый район), а акже осенняя - в 18 районах (по 300-600 доз) с использованием вакцины "Лисвуль-[ен" из штамма САД-БЕРН, а в качестве примаики - брикеты, в состав которых вве-;сн тетрациклин - индикатор вакцинопрофилактики. В 1998 г проведена весенняя акцинация в 31 районе (по 400-700 доз) вакциной "Лисвульпен" и осенняя - в 33 1айонах (по 300-700 доз) вакциной "Сиираб"; в 1999 г - весенняя вакцинащи - в 27 огонах (по 400-700 доз) вакциной "Синраб" и осенняя - в 29 районах (по 400-700 ;оз), в 2000 г весенняя - в 29 районах (по 400-700 доз) вакциной "Синраб".

В результате проведенных мероприятий отмечено значительное улучшение об-тановки по заболеванию бешенством среди животных в 1997 г. В целом, в 1997 г. за-олеванис зарегистрировано в единичных случаях в 17 районах республики (всего 33 лучая против 104 случаев в 1996 г). Однако некоторое улучшение обстановки по бе-тенству в 1997 г сменилось очередным подъемом заболеваемости по этой инфекций 1998-1999 гг. Всего в 1998 г заболело 100 животных в 24 районах и 85 населенных унктах, в 1999г -148 животных в 21 районе и в 114 населенных пунктах.

В связи со сложной обстановкой по данному заболеванию в целом по России (епартамент ветеринарии МСХ РФ принял решение "Об усилении мероприятий но рофилактике бешенства" путем проведения оральной вакцинации в 1998 г диких ;ивотных против бешенства в наиболее неблагополучных республиках, краях и об-астях. РТ получила 15 тыс. доз вакцины "Синраб" из штамма "РБ-71" для оральной ммунизацин диких животных (производства ВНИИ защиты животных, Владимир), оторая была распределена по 33 районам республики (по 300-700 доз).

Анализ эффективности проведения оральной вакцинации дикой фауны в рес-ублике, начатая в 1996 г, показывает, чго за последние 3 года (1997-1999 гг) но эавнешно с периодом 1994-1996 гг в ряде административных районов отмечается тучшение обстановки но бешенству. Спад доли неблагополучных пунктов и напря-:енности эпизоотической ситуации для Азпакаевского района составил соответствию в 1,6 и 1,1 раза, Алькеевского - 3,7 и 5,3 раза, Мензелинский - 6,5 и 9,8 раза, 1услюмовского - 5,3 и 5,3 раза, Сармановского - 4,0 и 6,0 раза, 'Гстюшского - 6,0 и ,6 раза, Тукаевского - 4,1 и 11,3 раза. За 6 мес текущего года отмечается улучшение шзоотической обстановки в 20,3 раза по сравнению с тем же периодом 1999 г. Так, 1 6 мес 2000 I' зарегистрировано 7 случаев (5 пунктов) бешенства, в том числе среди ас - 4, собак - 2 и лошади в 5 административных районах. В то же время за 6 мес Э99 г было зарегистрировано 142 случая (109 пунктов) бешенства среди животных, в зм числе 60 гол к.р.с., 8 лошадей, 49 лис, 13 собак, 6 кошек, 5 овец и лося в 15 адми-тстративных районах.

Вакцинация диких плотоядных животных против бешенства в РБ начата с ^94 г и проводится ежегодно по настоящее время. Для оральной иммунизации диких ивотных в период 1994-1998 гг применялась вакцина "Лисвульпен" из штамма САД-ЕРН, с 1999 - вакцина "Синраб" из штамма "РБ-71". В наиболее неблагополучных по лпенству районах таких, как Абзелиловский, Бакалинский, Ермикеевский, Илишев-сий; Кармаскалинский и др., где заболевание за последние 2 года (1998-1999 гг) за-;гисгрировано от 13 до 71 случая, проведена иммунизация лис в дозе от 400 до 1000. ордонную вакцинацию получили лисы в среднем по 200-400 доз в угрожаемых зо-

пах Ленинского, Белорецкого, Дуванского, Ишимбайского, Караидельского, Мече линского, Пуримановского и др. районов, где бешенство за этот период не зарегис рировано.

Несмотря на проведенные профилактические мероприятия в дикой фауне РБ последние 2 года (1998-1999 гт) бешенство зарегистрировано в 42 районах и 458 н селенных пунктах, у 682 животных, в том числе среди с.-х. - 245 случаев, диких - Ъ и домашних животных - 159. Вместе с тем, за 6 мес 2000 г в республике зарегистр ровано всего 7 случаев бешенства среди животных, в том числе у 3 лисиц, 2 собак и гол. к.р.с. Анализ эффективности проведения оральной вакцинации дикой фауны б дет продолжен.

Бешенство, распространяемое очень подвижными носителями возбудителя, I признает ни административных, ни государственных границ. Поэтому необходт постоянная информационная связь между всеми административными районами приграничными территориями сопредельных республик и областей. Кроме того, щ. ликвидации выявленных в ходе эпизоотологичсского надзора очагов стационарно! неблагополучия и создания защитных иммунных барьеров необходимо, на на1 взгляд, с учетом данных литературы разработать на уровне Среднего Поволжья Прс грамму одновременного проведения широкомасштабных кампаний оральной имм} низации диких хищников в регионе. В этой Программе должны быть определены ц( ли, обоснования, технические и организационные детали и бюджетные потребиост проекта, а также установлены сферы ответственности участвующих учрежденш Важную роль в планировании, выполнении и оценке программ борьбы с бешенство! играет эпизоотологический надзор. По мнению Комитета экспертов ВОЗ, такой на/ зор обычно бывает удовлетворительным перед вакцинацией, особенно если охотни кам назначают вполне достаточные премии за предоставление проб или отлов живот ных, подлежащих обследованию. В целях стимулирования активного энизоотологи ческого надзора за бешенством в районах успешного осуществления кампании перо ральной вакцинации Комитет экспертов ВОЗ (1994) рекомендует внедрять процедур выдачи международного (межрегионального, районного) свидетельства о статус территории, свободной от бешенства.

3.5. Разработка диагностических препаратов для выявления и идентифи нации возбудителя лихорадки Ку на основе моноклоиальных антител. Для полу чения антителопродуцирующих гибридом в качестве доноров спленоцитов исиользо вали белых мышей линии ВАЬВ/с. Иммунизирующим антигеном служил эпизооти ческий штамм "Барабинскин" возбудителя лихорадки Ку (1 фазы), очищенный и кон центрированный путем дифференциального центрифугирования в ступенчатом гра диенте плотности сахарозы, с активностью в ИФА 1:2048 (Ксп=2,2). Из трех испытан ных схем иммунизации оптимальной оказалась та, при которой сочетали внутрибрю шинное и подкожное введение антигена (в дозе от 0,2 до 0,3 мг на мышь) с полнь» адъювантом Фрейнда с интервалом между инъекциями в 30, 5, 20 и 7 дней и последнее внутрибрюшинное введение - за 3 дня до гибридизации. При этом титр антител е сыворотке крови мышей линии ВАЬВ/с был максимальным и составлял в РДСК -1:160, в ИФА - 1:3200 (Ксп=2,1).

В работе мы использовали две линии миеломных клеток, дефектных по ферменту гипоксантингуанин-фосфорибозил-трансферазе (ГГФРТ):8р2/0-А§4.1 и N50/1-Ag4.1, не синтезирующие собственные иммуноглобулины. Эти линии получены от мышей линии ВАЬВ/с, что дает более эффективную гибридизацию с В-лимфоцитами

.шшен. Для отбора гибридом использовали селективную среду с гипоксантином, шиноптерипом и тимидином (среда ГЛТ). При первичном скрининге методом не-грямого ИФА колоний гибридных клеток, полученных в наших экспериментах после ;лияния В-лимфоцитов с клетками миеломы NS0/l-Ag4.1, было выявлено 24,4% но-1ИТИВНЫХ гибридом, а при слиянии с клетками миеломы Sp2/0-Ag 4.1 - 32,1%. В даль-гейших исследованиях для гибридизации использовали миеломные клетки Sp2/0-Ag kl. Методом реклонирования отобрано 54 позитивных клона, из них-13 стабильных слонов, продуцирующих антитела к коксиеллам Бернета,1 фазы. Изучена динамика юста гибридом в культуральной жидкости. Максимальное накопление их с титром . :128-1:256 наблюдается на 180 день культивирования. Гибридомы сохраняют фупк-цтональную активность при хранении их в жидком азоте при -196°С в течение 12 гсс. Установлена возможность применения МКА в непрямом МФА для диагностики шхорадки Ку с активностью 1:4-1:16.

Показана возможность изготовления иммунопероксидазных конъюгатов ira ос-юве МКА, обладающих фазовой специфичностью и активностью 1:100-1:200, что отрывает перспективу для дифференциальной диагностики данного заболевания.

Итогом этих исследований явился разработанный нами "Набор препаратов на 1Снове моноклональных антител для диагностики лихорадки Ку методом иммупо-юрментпого анализа (ИФА)", а также НТД к нему (Временное наставление, утв. ДВ ЛСХиП РФ 26.03.96 г., ТУ-9384-009-008064-96, утв. ДВ МСХиП РФ 18.03.96 г. и (ременная инструкция, утв. директором ВНИВИ 29.02.96 г.).

3.6. Разработка схем иммунологического мониторинга бешенства и лихо-1адки Ку. На основании проведенных исследований разработаны эффективные сред-тва и методы иммунологического мониторинга бешенства и лихорадки Ку, а также хемы их проведения.

Иммунологический мониторинг бешенства рекомендуется проводить следую-дам образом: первоначально для быстрого выявления вирусного антигена в патоло-ическом материале использовать МФА или ИФА. В случае отрицательных результа-ов по вышеуказанным тестам или для подтверждения диагноза - проводить выделе-ие уличного вируса из инфицированного материала посредством культуры клеток 1ГУК-1 с последующим анализом по МФА или ИФА. Перспективным в этом направ-ении является и применение МКА, обладающих моноспецифнчностыо по сравнению обычными аитисыворотками и позволяющих проводить идентификацию штаммов абического вируса, в частности дифференцировать серотипы вирусов группы бе-ieneraa (М.А. Селимов, 1987; А.Д. Ботвинкин, Л.Я. Грибанова и др., 1990; А.Д. Бот-инкин, М.А. Селимов и др. 1990; И.В. Кузьмин, А.Д. Ботвинкин и др., 1992, И.В. узьмин, З.С. Лукашенко, 1998, М.А. Селимов, А.Д. Ботвинкин и др., 1994 и др.). Потому в "Схему иммунологического мониторинга бешенства" мы включили и идеп-тфикацию эпизоотических штаммов рабического вируса с помощью МКА.

Иммунологический мониторинг лихорадки Ку рекомендуется проводи ть на ос-эве ноли- и моноклональных антител, обеспечивающие достоверное обнаружение и аентификацию возбудителя в патологическом материале от грызунов, с.-х. животах и клещей, собранных в природном очаге, методами ИФА, МФА и постановкой иопробы (ira белых мышах или в культуре клеток куриных фибробластов), а также лявление специфических антител в сыворотках крови сельскохозяйственных живот-ых п грызунов в РДСК и МФА с использованием антигена из возбудителя лихорадки у, 1 фазы. Лабораторный диагноз на лихорадку Ку ставят при наличии положитель-

ного результата по вышеуказанным методам. Окончательный диагноз устанавливае ся на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических дапш с учетом результатов лабораторного исследования.

Схемы иммунологического мониторинга бешенства и лихорадки Ку утвержд ны директором ВЫИВИ 5.06.97 г. Результаты проведенных исследований вошли разработанные нами "Методические указания но лабораторной диагностике лихора ки Ку животных" № В-6-2/600, утвержденные ДВ МСХиП РФ 13.05.96 г., а таю "Методические указания по лабораторной диагностике бешенства", утвержденные Д МСХиП 14.05.97 г.

4. ВЫВОДЫ

1. Впервые проведен эпизоотологический и иммунологический мониторинг представлена комплексная характеристика эпизоотолого-эпидемиологической ситу ции по заболеваемости бешенством в Республиках Татарстан и Башкортостан за 1971 1999 гг.

2. За исследуемый период бешенство в Татарстане регистрировалось в 41 ра! оне, 6 городах и 633 населенных пунктах; у 1109 животных, в т.ч. 622 - сельскохозя! ственных (56,1%), 128 -домашних (11,5%) и 357 - диких (32,4%); соответственно Башкортостане - в 50 районах, 14 городах и 1726 населенных пунктах, в которых з; болело 3846 животных, в т.ч. 2121 сельскохозяйственных (55,2%), 740 -домашни (19,2%) и 985 - диких (25,6%). Максимальная заболеваемость бешенством в Тата| стане среди сельхозживотных установлена у крупного рогатого скота (78,1%), дс машних - у собак (62,5%), диких - у лисиц (93,0%); в Башкортостане соответственн - 71,7%; 81,8% и 91,7%. Основными носителями и распространителями бешенства Татарстане являются лисицы, в Башкортостане - лисицы и безнадзорные собаки.

3. По показателям степени напряженности эпизоотической ситуации район 1 Татарстана и Башкортостана разделены на 4 группы. В Татарстане для первой групп] районов он варьировал ог 0,068 до 0,656, второй - от 0,010 до 0,056, третьей - от ( 010 и ниже; Башкортостане соответственно для первой группы районов - от 0,057 д 0,85, второй - от 0,024 до 0,057, третьей - от 0,024 и ниже. К четвертой группе отне сены районы, где бешенство за исследуемый период не регистрировалось.

4. Проведено картографирование неблагополучных районов РТ и РБ. При это! установлено, что стационарно неблагополучные по бешенству районы Татарстан расположены в восточной части Закамья, на Бутульминеко-Бслебеевской возвышен ности и представляют "ядро" природных очагов в республике; в Башкортостане -степной и лесостепной зонах юго-западной, северо-западной, а также юго-восточно! частях республики.

5. Установлена трех-пятилстняя периодичность заболеваемости животных бе шенством в РТ и двух-трехлетняя - в РБ с максимальным его проявлением в весенне зимне-осенние периоды года (33,8-31,3-20,9%% и 32,5-45,9-14,6%% соответственно) связанная с биологией лисиц.

6. Изысканы оптимальные схемы иммунизации кроликов и овец для получени. высокоактивных и специфичных антириккетсиозных и антирабических сыворото] крови с титром комилементсвязывающих антител 1:320 - 1:1280, а также - оптималь ные условия получения иммуноглобулинов, конъюгагов и антигенов.

7. Представлено научно-практическое обоснование эффективности ИФА I МФА для ускоренной диагностики бешенства и лихорадки Ку. Установлена возмож

ность применения ИФА для выявления антигена вируса бешенства в патологическом материале и показана совпадаемость результатов ИФА с данными биопробы на белых мышах (в 98,4%) и с МФА (98,9%). При этом порог чувствительности метода ИФЛ составил 3,3 ^ ЬО50/мл, МФА -3,8 ^ 1Л)5о/мл. Установлено, что сэндвич-вариант ИФА и МФА позволяют обнаруживать антиген возбудителя лихорадки Ку в паренхиматозных органах экспериментально зараженных животных не зависимо от штам-мовой принадлежности в 100% случаев за 3-7 ч. и в 95-100% случаев за 2-3 ч. соответственно.

8. Усовершенствованные экспресс-методы диагностики бешенства на основе фермента пирофосфатазы из Г.соН и флуорохрома ФАР-4 расширяют арсенал диагностических средств и методов исследования. Чувствительность пирофосфатазного им-муноанализа составила 3,5 1.Г)5о. МФА с применением ФАР-4 - 3,9 ГО;а.

9. Иммуноферментная 7ест-система обеспечивает выявление специфических антител в сыворотках крови животных и людей, иммунизированных против бешенства. Сравнительное исследование 1266 проб сывороток крови в непрямом ИФА, РДСК и РН на мышах выявило прямую корреляцию этих результатов и высокую чувствительность ИФА. При этом чувствительность ИФА превосходила таковую в РДСК в 100-200 раз; по быстроте постановки ИФА также превосходит РН на мышах и РДСК. Установлено, что иммуноферментная тест-систсма обеспечивает обнаружение анти-риккетсиозных антител в сыворотке крови больных и экспериментально зараженных животных в течение 7-8 ч и превышает чувствительность РДСК в 80-800 раз.

10. Установлена высокая чувствительность клеток НГУК-1 для диагностического выделения уличного рабнческого вируса. При сравнительном исследовании 443 проб патологического материала установлено полное совпадение результатов биопробы на мышах и в культуре клеток НГУК-1. Показано, что в данной культуре клеток уличный рабический вирус может быть выделен в более ранние сроки (24-72 ч.), чем при итрацеребральной инокуляции мышей (до 30 суток); первично-трипешшзиропашгая культура клеток куриных фибробластов гго сравнению с биопробой обеспечивает обнаружение антигена возбудителя лихорадки Ку в более ранние сроки. Методы выделения возбудителей этих зооантроионозов в культурах клеток рекомендованы для внедрения в практику ветеринарных лабораторий.

11. Изучением иммунобиологических свойств изолятов вируса бешенства, циркулирующих на территории Татарстана и Башкортостана, установлена их пато-генность для сельскохозяйственных, домашних и лабораторных животных и антигенное родство с вакцинными штаммами "Овечий" ГНКИ и "Щелково-51", что имеет определенное значение при проведении профилактических мероприятий и диагностических исследований в регионе. Однако изоляты вируса бешенства, циркулирующие на территории нашей страны, идентифицированные с помощью непрямого МФА с использованием антинуклсокапсидных моноклональиых антител, по антигенной нук-леокапсидной структуре являются неоднородными.

12. Впервые получены гибридомы, продуцирующие моноклональные антитела к возбудителю лихорадки Ку, штамм "Барабинский" (1 фазы), и показана возможность применения МКА в непрямых вариантах МФА и ИФА. Установлена фазовая специфичность иммуноферментных копъюгатов, изготовленных на основе МКА, что открывает перспективу для дифференциальной диагностики данного заболевания.

13. Разработаны средства и методы иммунологического мониторинга бешенства и лихорадки Ку па основе поли- и моноклональных антител и схемы их проведе-

ния, обеспечивающие достоверное обнаружение и идентификацию возбудителей е патматериале, а также выявление специфических антител в сыворотках крови вакцинированных животных.

14. Созданные для практического применения Наборы препаратов иммунологического мониторинга бешенства и лихорадки Ку и предложенные рекомендации по усовершенствованию мер борьбы с бешенством способствуют успешному проведению противоэпизоотических мероприятий и ликвидации этих зооатропонозов.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

5.1. Результаты проведенных исследований вошли в следующие внедренные в практику нормативно-технические документы:

- Временную инструкцию по изготовлению и контролю антирабического глобулина оранжсво-красной люминесценции для диагностики бешенства, утвержденную директором ВНИВИ 01.11.90 г.

- Временное наставление по применению антирабического глобулина оранжево-красной люминесценции для диагностики бешенства, согласованное ВГНКИ 11.03.91 г.

- Технические условия к "Антирабическому глобулину оранжсво-красной люминесценции для диагностики бешенства", согласованные ВГНКИ 11.03.91г.

- Временную инструкцию по изготовлению и контролю набора препаратов для лабораторной диагностики бешенства методом пирофосфатазного иммуноанализа, утвержденную ГУВ при ГК СМ СССР по продовольствию и закупкам 03.04.91 г.

- Временное наставление по применению набора препаратов для лабораторной диагностики бешенства методом пирофосфатазного иммуноанализа, утвержденное ГУВ при ГК СМ СССР по продовольствию и закупкам 03.04.91 г.

- Технические условия к "Набору препаратов для лабораторной диагностики бешенства методом пирофосфатазног о иммуноанализа", утвержденные ГУВ при ГК СМ СССР по продовольствию и закупкам 03.04.91г.

- Временное наставление по применению набора компонентов на основе моно-клональных антител для диагностики лихорадки Ку методом иммуноферментного анализа, утвержденное ДВ МСХиП РФ 25.01.96 г.

- Временную инструкцию по изготовлению и контролю набора компонентов на основе моноклональных антител для лабораторной диагностики лихорадки Ку методом иммуноферментного анализа, утвержденную директором ВНИВИ 29.02.96 г.

- Технические условия ТУ-9394-009-000080-96 к "Набору компонентов на основе моноклональных антител для лабораторной диагностики лихорадки Ку методом иммуноферментного анализа (ИФА)", утвержденные ДВ МСХиП РФ 18.03.96 г.

- Методические указания по лабораторной диагностике лихорадки Ку животных, № В-6-2/600, утвержденные ДВ МСХиП РФ 13.05.96 г.

- Санитарные правила СП 3.1.095-96, Ветеринарные правила ВП 13.3.1221-96 "Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Коксиеллез (лихорадка Ку)", утвержденные и внедренные в действие ГК Санэиидпад-зора России 31.05.96 г., № 11 и ДВ МСХиП РФ 18.06.96 г., № 23.

- Методические указания по лабораторной диагностики бешенства, утвержденные ДВ МСХиП РФ 14.05.97 г.

- Инструкцию по изготовлению и контролю препаратов для лабораторной ди-

гностики бешенства животных методом иммуноферментного анализа, утверждению директором ВНИВИ 22.01.96 г.

- Технические условия ТУ-9388-083-00008064-98 к "Набору препаратов для ла-юраторнои диагностики бешенства животных методом иммуноферментного анали-:а", утвержденные ДВ МСХиП РФ 11.12.98 г. Получено регистрационное удостоверение ДВ МСХиП РФ № Р066-1 -4.9-0588 от 06.06.2000 г.

- Наставление по применению набора препаратов для лабораторной диагности-си бешенства животных методом иммуноферментного анализа, № 13-7-2/1453, утвержденное ДВ МСХиП РФ 11.12.98 г.

- Инструкцию но изготовлению и контролю флуоресцирующего ангирабиче-жого глобулина, утвержденную директором ВНИВИ 03.11.95 г.

- Технические условия ТУ-9388-083-00008064-98 к "Флуоресцирующему антн-эабическому глобулину", утвержденные ДВ МСХиП РФ 21.01.2000 г. Получено реги-лрационное удостоверение ДВ МСХиП РФ № Р066-1-1.9-0587 от 06.06.2000 г.

- Наставление по применению флуоресцирующего антирабического глобулина № 13-7-2/1859, утвержденное ДВ МСХиП РФ 21.01.2000 г.

- Рекомендации по усовершенствованию противоэпизоотических мероприятий при бешенстве, вошедшие в республиканскую программу "О мероприятиях по профилактике заболевания бешенством в Республике Татарстан". Постановление № 403 пт 22.05.96 г. Кабинета Министров Республики Татарстан и "О дополнительных мерах по борьбе с бешенством животных в Республике Башкортостан". Постановление N° 132 от 10.04.96 г. Кабинета Министров Республики Башкортостан.

- Наставление по применению набора препаратов для выявления антирабиче-ских антител методом иммуноферментного анализа, утвержденное директором ВНИВИ 26.02.97 г.

5.2. Предложены для применении в ветеринарной практике:

- Наборы препаратов для диагностики бешенства и лихорадки Ку методом ИФА и МФА на основе иоликлональных антител и очищенных антигенов, позволяющих обнаруживать возбудителей этих болезней в патологическом материале и выявлять специфические антитела в сыворотках крови больных и вакцинированных животных.

- Диагностический набор препаратов для идентификации возбудителя лихорадки Ку в патматериале методом ИФА на основе моноклональных антител.

- Перевиваемая культура клеток невриномы Гассерова узла крысы (ПГУК-1) и первично-трипсинизированная культура клеток куриных фибробластов (КФ) для диагностического выделения соответственно уличного рабического вируса и риккетсий Бернета из патологического материала.

- Схемы иммунологического мониторинга бешенства и лихорадки Ку.

- План организации мероприятий по профилактике бешенства лисиц.

5.3. Рекомендуем:

- Для создания устойчивой иммунологической защиты к вирусу бешенства у сельскохозяйственных и домашних животных в стационарно неблагополучных районах Татарстана и Башкортостана проводить вакцинацию всего поголовья в течение двух-трех лет.

- С целью снижения энзоотии бешенства в Республике Татарстан и на приграничных с ней территориях разработать на уровне Среднего Поволжья Программу одновременного проведения широкомасштабных кампаний оральной иммунизации ди-

ких хищников в регионе в сочетании с регулированием их численности.

СПИСОК

основных научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Хисматуллина H.A. Технология получения антирабических пероксидаз-ных коныогатов //Тез. докл. Ill Всесоюзн. конф.: Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов. 1987. -С. 195.

2. Хисматуллина H.A., Бусыгин К.Ф. Усовершенствование метода имму-ноферментного анализа для диагностики бешенства //Сб. научн. тр. Каз.вет.и-та -Казань. -1987. -С. 24-28.

3. Татаров А.Г., Хисматуллина H.A., Селимов М.А., Кармышева В.Я. Выделение рабического вируса и экспресс-диагностика бешенства в культуре перевиваемых клеток невриномы Гассерова узла крысы //Вопросы вирусологии. -1987. -Na 5. -С. 619-621.

4. Selimov M., Tatarov A., Botvinkin A., Kulikova L., Khismatullma N. The Rabies-Related Yuli virus and Its Identification with Panel of the Antinucleocapsid Monoclonal Antibodies (NC Mkab).//J. Rabies Information Exchange, June.-1987.-P.5-15.

5. Хисматуллина H.A., Юсупов P.X., Бусыгин К.Ф. Применение иммуно-ферментного метода для обнаружения антигена вируса бешенства в патологическом материале //Тез. 18 съезда Всесоюз. общества энидемиол., микробиол. и паразитол. -М.-1989.-С. 132-134.

6. Юсупов Р.Х., Хисматуллина H.A., Селимов М.А. и др. Оценка эффективности методов выделения уличных штаммов вируса бешенства в биологических системах //Ветеринария. -1989. -№ 4. -С. 27-29.

7. Селимов М.А., Татаров А.Г., Ботвинкин А .Д., Клюева Е.В., Куликова Л.Г., Хисматуллина H.A. Rabies-Related Yuli Virus: Identification With a Panel In Monoclonal Antibodies// Acta virol.- 1989. - V. 33.-P. 542-545.

8. Ботвинкин А.Д., Селимов M.A., Клюева Е.В., Грибанова Л.А., Хисматуллина H.A. и др. Антигенная характеристика полевых штаммов вируса бешенства из различных районов СССР с помощью моноклональных антител //ЖМЭИ.-1990.-№ 1 -С. 50-54.

9. Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х., Курбанова И.А. Обнаружение антител к коксиеллам Бериета методом иммуноферментного анализа //Межвуз. сб. научн. тр. Каз.вет.и-та.Вопр. инфекц. патологии животных. -Казань. -1994. -С. 32-35.

10. Хисматуллина H.A., Курбанова И.А., Макачев И.З., Юсупов Р.Х. Флуоресцирующий глобулин для диагностики лихорадки Ку //Межвуз. сб. научн. тр. Каз.вет.и-та. Вопр. инфекц. патологии животных. -Казань. -1994. -С. 41-43.

11. Хисматуллина H.A., Курбанова И.А., Гильмутдинов РЛ. и др. Получение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к возбудителю лихорадки Ку //Тез. докл. Всерос. научно-практ. конф. по вирусным болезням с.-х. животных. -Владимир. -1995. -С. 210.

12. Хисматуллина H.A., Курбанова И.А., Гильмутдинов Р.Я., Юсупов Р.Х. Применение моноклональных антигел для диагностики лихорадки Ку животных //Тез. докл. Всерос. научно-практ. конф. по вирусным болезням с.-х. животных. -Владимир. -1995.-С. 68.

13. Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х., Курбанова И.А. Производство набо-

10В препаратов для лабораторной диагностики бешенства //Тез. докл. Всерос. научн. :опф. -Владимир. -1995. -С. 73.

14. Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х., Курбанова И.А. Краевая эпизоотоло-ия бешенства в Республике Татарстан и роль диких животных в распространении той болезни/ЛГез.докл.Всерос. иауч. конф.-Владимир.-1995.-С. 173.

15. Хисамутдинов Ф.Ф., Бурганов Э.Г., Хисматуллина H.A. и др. Эпизооти-[еская С1ггуация но бешенству в Республике Татарстан // Тр. Первого съезда ветери-[арных врачей Республики Татарстан. -Казань. -1995. -С. 117-120.

16. Хисматуллина H.A., Тятигачев Ш.А., Янбарисова С.Р., Юсупов Р.Х. Зцснка иммунного статуса у вакцинированных против бешенства животных и людей 1етодом иммуноферментного анализа //Тез. докл. II респуб. научн. конф. по пробле-1ам ветеринарии и животноводства. -Казань. -1996. -С. 57.

17. Хисматуллина H.A., Янбарисова С.Р., Тятигачев Ш.А., Юсупов Р.Х. Трименение твердофазного иммуноферментного метода для контроля за состоянием гриродных очагов бешенства //Тез. докл. II респуб. научн. конф. по проблемам вете-1инарии и животноводства. -Казань. -1996. -С. 56.

18. Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х. Производство препаратов для лабора-орной диагностики животных методом иммуноферментного анализа (ИФА) //Тез. (окл. V Всерос. конф. -Щелково. -1996. -С. 47-48.

19. Хисматуллина H.A., Курбанова И.А., Гильмутдинов Р.Я. и др. Технолога изготовления и контроля набора компонентов на основе моноклональных антител 1ля лабораторной диагностики лихорадки Ку методом иммуноферментного анализа /Тез. докл. V Всерос. конф. по научным основам технологии промышленного произ-юдства ветеринарных биологических препаратов. -Щелково. -1996. -С. 47-48.

20. Хисматуллина H.A., Курбанова И.А., Юсупов Р.Х. Комплексная диагно-:тика лихорадки Ку в эпизоотическом очаге //Тез. докл. междун. координационного ;овещания. -Воронеж. -1997. -С. 366-367.

21. Хисматуллина H.A., Курбанова И.А., Юсупов Р.Х. и др. Разработка сис-емы иммунологичского мониторинга при лихорадке Ку животных //Тез. докл. меж-iyu. координационного совещания. -Воронеж. -1997. -С. 367-368.

22. Хисматуллина H.A., Янбарисова С.Р. Усовершенствование диагностики 5ешенства на основе применения нового фермента и флуорохрома //Тез. докл. Респуб. гаучно-произв. конф. -Казань. -1997. -С. 57.

23. Хисматуллина H.A., Чернов А.Н., Тятигачев Ш.А., Курбанова И.А. Ор-шгизация проведения оральной иммунизации лисиц //Матер. Респуб. научно-произ. сонф. по актуальным проблемам ветеринарии и животноводства. -Казань. -1997. -:. 58.

24. Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х., Чернов А.Н. и др. Выделение и изуче-ше патогенных и антигенных свойств штаммов вируса бешенства, циркулирующих га территории Татарстана и Башкортостана //Тез. докл. междун. координационного совещания. -Воронеж. -1997. -С. 146.

25. Хисматуллина H.A. Применение моноклональных антител для диагностики бешенства и лихорадки Ку //Матер. Междун. конф., посвяш. 125-летию Каз. шадемии ветерин. медицины (часть 1). -Казань. -1998. -С. 105-107.

26. Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х. Разработка схемы иммунологического мониторинга при бешенстве //Матер. Междун. конф., посвященной 125-летию Каз. кадемии ветерин. медицины (часть 1). -Казань. -1998. -С. 109-110.

27. Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х., Чернов А.Н. и др. Взаимосвязь забс леваемости животных бешенством и плотности популяции дикой фауны в Республик Татарстан //Матер. Мсждун. конф., посвящ. 125-летию Каз. академии ветсрин. меди цины (часть 1). -Казань. -1998. -С. 105-107.

28. Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х., Бусыгин К.Ф. и др. Способ получени инакгивированпого антигена для серологической диагностики бешенства животные Патент РФ № 1824196 от 05.03.94 т.

29. Хисматуллина ILA. Оценка эффективности иммунохимических методо! диагностики бешенства //Матер, юбилейной научн. конф., посвящ. 70-летшо НИ1-микробиологии МО РФ. -Киров. -1998. -С. 77-78.

30. Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х., Чернов А.Н. и др. Эпизоотическая си туация но бешенству в Татарстане и внедрение рекомендаций по борьбе с этой инфекцией //Тез. докл. научи, конф.: Современные проблемы рабиологии. -М. -1998. -С. 14-15.

31. Тятигачев III.А., Юсупов Р.Х., Хисматуллина H.A. Краевая эпизоотология бешенства животных и усовершенствование мер борьбы с ним в Республике Башкортостан //Тез. докл. научн. конф.: Современные проблемы рабиологии. -М. -1998. -С.13-14.

32. Хисматуллина H.A. Разработка иммунохимических методов диагностики лихорадки Ку //Матер. Междун. научно-практ. конф., посвящ. 40-легию ВНИИВВиМ. -Покров. -1998. -С. 340-342.

33. Хисматуллина H.A. Биологическая характеристика изолятов рабического вируса, циркулирующих в эпизоотических очагах Татарстана //Тез. докл. научн. конф.: Проблемы инфекционных и инвазионных болезней животных на соврем, этапе. -М. -1999.-С. 68-69.

34. Хисматуллина H.A., Сахибуллин H.A., Юсупов Р.Х. О связи заболеваемости животных бешенством с солнечной активностью //Матер, юбилейной научн. конф., посвящ. 50-летию Центра военно-технич. проблем биологич. защиты НИИ микробиологии МО РФ-Екатеринбург. -1999. -С. 266-268.

35. Хисматуллина H.A. Серологический контроль при антирабичсской вакцинации животных //Тез. докл. научн. конф.: Проблемы инфекционных и инвазионных болезней животных на соврем, этапе. -М. -1999. -С. 95-96.

36. Хисматуллина H.A. Изыскание чувствительных к возбудителю лихорадки Ку культур клеток /Матер, юбилейной научн. конф., посвященной 50-летию Центра военно-технич. проблем биологич. защиты НИИ микробиологии МО РФ. -Екатеринбург. -1999. -С. 268-269.

37. Хисматуллина H.A., Сахибуллин H.A., Юсупов Р.Х. и др. Солнечная активность и прогнозирование эпизоотии бешенства в Татарстане //Тез. докл. научн. конф.: Проблемы инфекционных и инвазионных болезней животных на соврем, этапе. -М.-1999.-С. 69-71.

38. Хисматуллина H.A., Юсупов Р.Х. Цикличность бешенства в Татарстане и организация планирования профилактических мероприятий против этой болезни //Матер, юбилейной научн. конф., посвящ. 50-легию Центра военно-технич. проблем биологич. защиты НИИ микробиологии МО РФ. -Екатеринбург. -1999. -С. 269-270.

39. Горловская Э.В., Баранчук И.И., Хисматуллина H.A. и др. К вопросу прогнозирования эпизоотии бешенства в Республике Татарстан //Матер, регион, науч. конф., посвящ. 85-летшо первой антирабической прививке в Вятской губернии. -Ки-

Поделиться с друзьями: